NaHCO3胁迫下3种灌木Na+、K+、Ca2+的吸收及转运

通过盆栽试验,采用原子吸收分光光度法和非损伤微测技术,研究了NaHCO₃胁迫(300 mmol·L^-1)对大洋洲滨藜、四翅滨藜和宁夏枸杞3种灌木离子吸收及运转的影响.结果表明: 随着NaHCO₃浓度升高,两种滨藜和宁夏枸杞叶片中Na⁺含量升高,300 mmol·L^-1NaHCO₃胁迫下,宁夏枸杞叶肉细胞Na⁺的外排增加,两种滨藜净Na⁺外排降低;随着胁迫时间的延长,大洋洲滨藜和宁夏枸杞叶片的K⁺含量下降,Na⁺/K⁺升高,四翅滨藜叶片K⁺含量升高,Na⁺/K⁺降低;随着浓度的升高,宁夏枸杞叶片积累Ca²⁺减少,Na⁺/Ca²⁺高于对照,叶肉细胞Ca²⁺外排;两种滨藜叶Ca²⁺含量总体呈升高趋势,叶肉细胞Ca²⁺表现为内流.在NaHCO₃胁迫下,3种灌木通过不同的策略来消除Na⁺毒害.宁夏枸杞叶片Na⁺的积累抑制了对Ca²⁺的吸收;两种滨藜Ca²⁺的内流促使细胞质中游离Ca²⁺增加,增加的细胞质[Ca²⁺]cyt防治质膜H⁺ ATPase去极化,限制K⁺的外排,从而维持细胞内Na⁺/K⁺的平衡,其中四翅滨藜调控Na⁺/K⁺平衡的能力较强.     

川芎嗪增加大鼠远端结肠阴离子分泌的基侧膜机制

本研究用短路电流技术来观察在川芎嗪作用下,电解质在大鼠远端结肠上皮细胞的转运及其细胞机制。在新鲜分离的结肠上皮的基侧膜加入川芎嗪,能产生较大的短路电流。用粘膜下神经元阻断剂——河豚毒素预作用于结肠上皮,不影响随后的川芎嗪所产生的短路电流,前列腺素合成抑制剂indomethacin预作用可使随后的川芎嗪产生的短路电流减少55．2％。在结肠上皮的顶膜加入Cl^-通道阻断剂DPC和glibenclamide,能完全阻断川芎嗪产生的短路电流。Bumetanide,基侧膜钠、钾、氯共转运体阻断剂能抑制川芎嗪引起的短路电流的85．2％,而结肠上皮细胞基侧膜的非选择性钾通道阻断剂Ba^2 能阻断90％以上的短路电流,说明基侧膜的钠、钾、氯共转运体和钾通道在川芎嗪引起的短路电流中起着重要的作用。上述结果表明,川芎嗪刺激大鼠远端结肠上皮细胞分泌Cl^-是通过上皮细胞顶膜Cl^-通道和基侧膜的钠、钾、氯共转体和K^ 通道介导的。     

绿豆下胚轴质膜微囊的提取和H+-ATPase 活性研究

以两相法提取纯化绿豆下胚轴质膜微囊,材料与两相体系重量之比为32∶8时,一次洗膜就可以得到纯度较高的质膜微囊。提取缓冲液中牛血清白蛋白的浓度对质膜H+-ATPase的潜在活性有影响。质膜H+-ATPase水解活性依赖于Mg2+,Ca2+对酶活性有明显的促进作用。壳梭孢素（fusicoccin, FC）对酶有明显的刺激作用,活体条件最大刺激达到72％,而离体条件下刺激为30％。     

盐度变化对克氏原螯虾渗透调节影响机制的初步研究

本文研究了克氏原螯虾在盐度变化下血淋巴渗透压、鳃丝Na+-K+-ATPase活力和生物胺的变化过程和特征。结果显示：盐度变化（0－20‰）对克氏原螯虾血淋巴渗透压、鳃丝Na+-K+-ATPase活力和生物胺含量影响显著(p<0.05),而对照组无明显变化。在实验时间内各处理组血淋巴渗透压随盐度变化增大而升高,1－2d后趋于稳定,鳃丝Na+-K+-ATPase活力逐渐降低,6d后保持稳定,且渗透压正相关性,酶活力与盐度呈负相关性;各处理组在实验时间内血淋巴和鳃丝多巴胺、去甲肾上腺素、5-羟色胺含量均呈峰值变化,血淋巴中多巴胺、5-羟色胺含量分别在1d和3d时达到最小值和最大值,且变化过程分别与盐度变化值呈负和正相关性,并分别在6d和9d后趋于稳定,而各处理组的NE含量（除盐度为4的处理组）在0.5d内迅速升高,0.5－3d内略有波动,然后呈下降趋势,至15d时保持稳定;各处理组鳃丝多巴胺、去甲肾上腺素和5-羟色胺含量均于2d时达到最大值,且变化过程均与盐度变化值呈正相关性,均在9d后趋于稳定;稳定后各处理组血淋巴和鳃丝生物胺含量均与对照组无显著性差异。这些结果表明,在外界盐度变化下生物胺作为一种神经内分泌因子,在甲壳动物的渗透压调节过程中发挥重要作用,可引发甲壳动物产生的渗透调节过程,如激活鳃丝已有的Na+-K+-ATPase活力、调节血淋巴渗透压效应物含量以适应外界环境的变化。     

两种杀虫真菌制剂与低用量吡虫啉对温室粉虱的协同防效评价

在昆明市郊蔬菜基地4间大棚(5m×100m·间^-1)栽培的生菜上,用球孢白僵菌(Beauveriabassiana)和玫烟色拟青霉(Paecilomyces fumasonoseus)的纯孢子乳悬剂(有效含孢量10^10·ml^-1)及其与1％和3％(w／v)的吡虫啉10％WP的混配剂对温室粉虱(Trialeurodes vaporariorum)进行了协同药效试验,吡虫啉添加量仅相当于推荐用量的6．4％～9．5％和19．1％～28．6％,试验含6个菌剂处理、2个低用量吡虫啉处理和1个清水对照,各有3个小区(7m×5m·小区^-1)重复,随机区组排列,稀释1000倍的菌液(含孢量10^7·ml^-1)和吡虫啉液于生菜移栽后第11d首次喷雾,15d后喷第二次,首次用菌前调查初始粉虱密度,用菌后每隔5d调查活虫数和死虫数,从8月20日起历时30d,结果表明,连续2次用菌有效地控制了粉虱对当季大棚生菜的危害,各菌剂处理的最终相对防效和虫口减退率均达到95％以上,极显著地高于低用量吡虫啉处理,其中,玫烟色拟青霉制剂对粉虱的控制效果一般优于球孢白僵菌制剂,且与吡虫啉的添加量呈正相关,但是,各菌剂处理间控虫效果的差异主要发生在首次用菌后第5d和10d,此后差异逐渐缩小,至第二次用菌后第10d各菌剂处理间无显著差异,本试验结果表明,两种真菌的孢子乳悬剂均可用于温室粉虱的防治,添加微量吡虫啉可增强菌剂的防效。     

二甲双胍对斑马鱼骨骼发育及损伤修复的机制研究

二甲双胍(metformin,MET)是治疗糖尿病的一线药物,对骨骼疾病也有一定的治疗效果,但具体作用机制尚不明确.本研究利用斑马鱼(Danio rerio)构建骨质疏松模型,通过荧光观察、骨骼染色、半定量PCR、原位杂交及ELISA等技术方法,探究MET对斑马鱼骨骼发育及损伤修复的作用机制.首先通过胚胎致死率、骨骼矿...     

灵武长枣正常果及裂果中Ca2+的细胞化学定位研究

采用焦锑酸钾沉淀法,对灵武长枣正常果发育过程中的Ca2+及不同开裂度果实中的Ca2+进行细胞化学定位,在透射电镜下观察并比较Ca2+的分布特征和积累规律.结果表明:(1)正常长枣青果期的外果皮细胞及胞间隙中检测到大量的钙沉淀颗粒,而果肉细胞以及叶绿体中很少有钙沉淀颗粒.红果期很多外果皮细胞中钙沉淀颗粒特异性地沿细胞壁呈一圈分布,且越靠近内方的细胞中钙沉淀颗粒越少、越小.果肉细胞中仍无钙沉淀颗粒分布.(2)具轻微开裂的长枣很多外果皮细胞中无钙沉淀颗粒,只有少数细胞中有且集中分布于大液泡中;细胞质沿细胞壁分布,也无钙沉淀颗粒;在果肉细胞中几乎看不到钙沉淀颗粒分布.(3)完全开裂的长枣中钙沉淀颗粒只分布在少数体积较小的外果皮细胞中,而果肉细胞的细胞壁边缘或细胞壁以及胞间隙中分布有大量的钙沉淀颗粒.     

LHRH—A2及无机离子促进草鱼脑垂体离体分泌GH的初步研究

用培养瓶（皿）培养法研究ＬＨＲＨ－Ａ２、Ｃａ＾２＋、Ｋ＾＋对草鱼脑垂体器官分泌ＧＨ的影响。结果表明,１ｎｍｏｌ／Ｌ、１０ｎｍｏｌ／Ｌ、１００ｎｍｏｌ／Ｌ和１０００ｎｍｏｌ／Ｌ的ＬＨＲＨ－Ａ２都能显著促进ＧＨ的分泌;随着Ｃａ＾２＋浓度（０．１、１、３ｍｍｏｌ／Ｌ）的增高ＧＨ的分泌增强,在１ｍｏｌ／Ｌ和３ｍｍｏｌ／Ｌ Ｃａ＾２＋条件下的ＧＨ分泌水平显著高于在０．１ｍｍｏｌ／Ｌ Ｃａ＾２＋条件下的ＧＨ分     

蔓长春花对草地贪夜蛾杀虫活性成分及机制研究

为寻找对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda具有良好杀虫活性的化学成分,对蔓长春花石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯和水萃取物通过小叶碟添加法、浸叶法和浸虫法,测定其拒食、胃毒和触杀活性。结果表明：蔓长春花石油醚萃取物对草地贪夜蛾3龄幼虫的触杀活性最好,第1、3、5和7天的LC50分别为6.11、5.43、5.27和4.62 mg/mL。采用硅胶柱层析对蔓长春花石油醚萃取物进行分离,得到22个馏分,馏分5和馏分7的触杀活性最好。对馏分5进行GC-MS分析,主要化学成分为对二甲苯（17.56%）、壬烷（20.92%）和十三烷（28.33%）。馏分7经小孔树脂（MCI）分离后得到8个馏分,馏分Ⅵ的触杀活性最好,经GC-MS分析,主要化学成分为壬烷（19.09%）、十三烷（53.19%）和2,2,4,6,6-五甲基庚烷（5.21%）。对二甲苯的触杀活性最好,第1、3、5和7天时LC50分别为10.45、8.87、6.54和5.05 mg/mL。随着对二甲苯浓度的升高,乙酰胆碱酯酶（AChE）和Ca2+-Mg2+-ATPase的活性呈现先激活后抑制的趋势,羧酸酯酶（CarE）的活性呈现先抑制后激活的趋势。     

大鼠骨骼肌肌质网非序列依赖性DNA结合蛋白及其功能的初步研究

应用差速离心法分离大鼠骨骼肌肌质网(SR)膜蛋白,观察质粒DNA与SR上非核DNA结合蛋白的结合及其对SR功能的影响.结果显示:大鼠骨骼肌SR上存在序列非依赖性的DNA结合蛋白,分子量分别为83和58ku,质粒DNA与SR上DNA结合蛋白结合后可明显促进SR的Ca2+摄入与释放能力,其机制可能是通过增强SR上Ca2+-ATPase的活性及影响SR上Ca2+释放通道ryanodine受体的结合引起的.上述结果表明:SR上存在DNA结合蛋白,DNA与之结合后可影响SR的Ca2+转运.     

驱蛔中药的活性成分川楝素的生物效应

利用楝属植物皮和种子治疗消化道寄生虫病和防治农业虫害,早在两千年前的中国古代已有记载。川楝素（toosendanin,C30H38O11,FW=574）是我国科学家在上世纪五十年代从川楝皮提取、分离的一个用以代替进口驱蛔药山道年的三萜化合物。研究已证明川楝素具多种独特的生物效应和在科学研究、临床医学及农业上的应用价值。第一,川楝素以先易化后抑制的双相作用干扰神经递质释放,阻遏神经肌肉接头和中枢神经突触的突触传递。此作用可能是川楝素改变递质释放装置的Ca^2＋敏感性和使之最终完全消失的结果。第二,尽管川楝素与肉毒神经毒素阻遏神经肌肉接头传递的作用有许多相似,川楝素在离体和在体实验中均显示出极有效的抗肉毒神经毒素作用：川楝素可治愈致死量肉毒中毒的小鼠和猴;经川楝素孵育的离体神经肌肉标本,或由经一次川楝素注射的动物取出的神经肌肉标本具抵抗肉毒神经毒素作用的能力。已有证据表明抗肉毒神经毒素作用是通过川楝素阻隔肉毒神经毒素与其酶解底物SNARE蛋白的接近而实现的。第三,近年观察到川楝素还引发细胞分化和凋亡,抑制人的多种肿瘤细胞增殖。该作用是Ca^2＋依赖性的,有线粒体依赖的凋亡通路参与。第四,川楝素抑制多种K^＋通道,选择性地易化通过L型Ca^2＋通道的Ca^2＋流,并由此导致细胞内Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]i）持续升高。川楝素对K^＋通道的抑制,对L型Ca^2＋通道的易化和由之引起的[Ca^]．升高和超载,是川楝素引发细胞分化和凋亡、抑制细胞增殖,以及川楝素产生神经递质双相变化和阻遏突触传递的机制。     

烟草悬浮细胞在凋亡过程中Ca2+分布的共聚焦显微成像研究

以Fluo-3AM为游离Ca²⁺荧光探针,利用激光扫描共聚焦显微镜（Laser Scanning Confocal Microscope,LSCM）对烟草悬浮细胞在热激诱导的凋亡过程中Ca²⁺时空分布进行了研究。结果显示,在正常细胞中,Ca²⁺集中分布在细胞壁和细胞核中,细胞质中分布较少;在凋亡早期细胞中,细胞质中Ca²⁺的浓度增加;在凋亡晚期的细胞中,细胞核中的Ca²⁺浓度增加较为明显。结果提示,在凋亡过程中,Ca²⁺的定位分布存在一定的规律。     

泻根醇酸对NMDA诱导的PC12细胞损伤的保护作用研究

钙离子内流、Ca2+/钙调蛋白(Ca M)依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和c AMP应答元件结合蛋白(CREB)的磷酸化是NMDA诱导细胞凋亡的重要过程。本实验探讨了泻根醇酸(BA)对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及可能机制。MTT法测定细胞活力、测定LDH释放率、Fura-2/AM荧光标记法测定细胞内钙离子浓度,Western blot法测定CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREB、p-CREB、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果显示,与模型组相比,BA给药组细胞活力显著升高,LDH释放减少,[Ca2+]i降低,p-CREB,Bcl-2表达上调,Bax表达下调。BA能够通过Ca2+-CaMKⅡ-CREB信号通路保护NMDA诱导的PC12细胞损伤,进而有望成为脑缺血疾病的神经保护药物。     

TRPA1传导皮肤角质细胞温热信息的机制研究

目的 探究角质细胞中的温热信息是如何被传导至下游背根神经节（DRG）中的TRPA1离子通道。方法 采用单细胞钙离子成像技术,利用TRPA1过表达系统以及野生型和TRPA1基因敲除小鼠,联合TRPA1激动剂（BITC）和抑制剂（HC-030031）检测H₂O₂在DRG神经元温热感知中的作用及其与TRPA1的相关性。在不同温热条件下培养皮肤角质细胞,并提取角质细胞RNA;采用RNA-seq分析比较不同温度培养的角质细胞基因表达异同,筛选皮肤角质细胞传导温热信息的候选因子。结果 过表达TRPA1以及DRG神经元中的TRPA1均可在H₂O₂存在情况下被温热激活,而温热范围内不同温度可影响皮肤角质细胞中与H₂O₂产生有关的趋化因子配体2（CCL2）和核心蛋白聚糖（DCN）基因的表达。结论 H₂O₂相关因子可能参与TRPA1介导的温热传导过程。     

曲可芦丁联合胞磷胆碱对脑梗死患者认知功能的改善作用及机制

为了探讨曲克芦丁联合胞磷胆碱对脑梗死的治疗效果及机制,本研究将100例急性脑梗死患者分为对照组和观察组(n=50),对照组患者采用常规治疗,观察组在对照组治疗基础上加用曲克芦丁和胞磷胆碱.采用简易精神状态检查表(MMSE)对脑梗死患者的认知功能进行评价.将60只SD大鼠随机分为3组(n=20):假手术组、模型组和曲克芦...     

Syntaxin蛋白对神经母瘤细胞分化的影响及机制研究

Syntaxin是特异性地分布在神经细胞突触前质膜上的一种多结构域蛋白,它是细胞质膜融合的关键性蛋白,但Syntaxin在神经细胞分化过程中的作用尚未阐明。本实验旨在探讨Syntaxin蛋白对神经母瘤细胞分化的影响及其影响机制。通过在小鼠的神经母瘤细胞（N2a）中过表达不同的Syntaxin蛋白突变体,统计细胞的分化率、突起分支数和突起总长度等参数,来观察Syntaxin蛋白及其突变体对神经细胞分化的影响。通过实验结果得知Syntaxin蛋白促进神经母瘤细胞分化的作用位点在其氨基端的Habc结构域,主要影响细胞的分化突起数目和突起总长度,对细胞分化率无显著作用。     

Complexin蛋白对神经母瘤细胞分化的影响及机制研究

目的:探讨Complexin蛋白对神经母瘤细胞分化的影响及机制。方法:采用神经母瘤细胞(N2a)作为实验材料,在其中过表达Complexin蛋白以及其突变体后,利用激光共聚焦显微镜拍照并利用Image J软件对N2a细胞的分化比率、突起数量以及突起生长长度进行统计学分析。结果:在N2a细胞中过表达Cpx蛋白后,细胞分化率比对照组(即转染空白对照质粒)增加约2倍。Cpx1-86和Cpxpoorclamp突变体可促进N2a细胞的分化,而Cpx27-134突变体对N2a细胞分化无明显影响。随着时间的延长,过表达野生型Cpx蛋白和其N端缺失突变体都不能显著增加细胞突起的数量;但在转染4天后,过表达野生型Cpx蛋白能显著增加分化细胞的突起长度,而其N端缺失突变体不能引起突起长度的增加。结论:Complexin蛋白主要通过其N端序列促进神经母瘤细胞(N2a)的分化,增加分化后突起的长度,但对突起数量没有明显影响。     

细胞凋亡中的Bcl-2家族蛋白及其BH3结构域的功能研究

凋亡相关蛋白中的Bcl-2家族是细胞凋亡的关键调节分子,由抗凋亡和促凋亡成员组成,这些成员之间通过相互协同作用调节了线粒体结构与功能的稳定性,从而在线粒体水平发挥着细胞凋亡的“开关”作用.抗凋亡成员大都分布于线粒体的外膜,与促凋亡成员的BH3结构域相互作用对细胞凋亡发挥抵抗作用.促凋亡成员则主要分布于细胞浆中,细胞接受死亡信号刺激后,促凋亡成员自身受到一系列的调节,如典型的Bax构象改变、BAD和Bik的磷酸化调节以及Bid和Bim的蛋白裂解效应等,使得促凋亡成员在凋亡信号的刺激下整合于线粒体外膜,最终导致线粒体通透转换孔的开放,进而释放包括细胞色素c、凋亡诱导因子、Smac等重要的凋亡因子,随后caspase被激活进而断裂重要的细胞内结构蛋白与功能分子,执行细胞凋亡.     

穿心莲内酯恢复突变型p53野生型功能的作用及机制研究

目的 p53是人体内重要的肿瘤抑制因子,但在人类肿瘤中因高频突变而失去抑癌功能。突变型p53 (mutant p53,mutp53)可促进肿瘤的发生、发展和转移。由于在肿瘤细胞中通常有较高表达,mutp53已成为区别于正常细胞的一个特异性抗肿瘤靶点。本研究旨在探索穿心莲内酯的抗肿瘤作用机制,为寻找靶向mutp53的抗肿瘤化合物提供理论依据。方法 构建可以快速筛选具有恢复mutp53下游转录因子的荧光素酶系统,观察穿心莲内酯对H1299-p53 R273H-PUMAluciferase和H1299-p53R175H-PUMA-luciferase细胞中PUMA基因的表达情况;采用免疫荧光实验,检测穿心莲内酯对HT29(R273H)和SK-BR-3 (R175H)细胞中mutp53的表达影响;采用免疫印迹实验进一步观察穿心莲内酯恢复了mutp53肿瘤细胞中p53下游靶蛋白PUMA、p21、Noxa的表达;随后采用MTT和流式细胞分析,检测穿心莲内酯对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响;此外,还通过si RNA敲低Hsp70表达后,研究穿心莲内酯对mutp53下游基因的重激活作用。结果 穿心莲内酯可以...