急性低氧/复氧胁迫对克氏原螯虾抗氧化-能量代谢的影响

为研究低氧/复氧胁迫对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)抗氧化及能量代谢的影响,将克氏原螯虾暴露于(1.0±0.1) mg/L急性低氧胁迫和后续(6.8±0.2) mg/L复氧环境中,于低氧胁迫1h、6h及复氧1h、12h分别采集肝胰腺、鳃和血淋巴,研究低氧/复氧胁迫下克氏原螯虾抗氧化-能量代谢酶的活力变化,分析鳃和肝胰腺组织的超微结构改变。在低氧胁迫下,肝胰腺和血淋巴中SOD酶活力显著下降(P<0.05);复氧以后,肝胰腺、血淋巴及鳃组织中SOD酶活力均出现了显著上升(P<0.05)。SOD酶活力变化可能与复氧过程中超氧阴离子自由基的过量产生有关。在复氧12h后,血淋巴和鳃组织中MDA含量均出现了显著性增加(P<0.01),提示机体细胞在复氧胁迫下产生了脂质过氧化。在低氧胁迫下,肝胰腺、鳃和血淋巴中ACP、AKP酶活力显著上升(P<0.05);在复氧12h后,肝胰腺和鳃组织中ACP酶活力显著降低(P<0.01)。显示低氧/复氧胁迫影响了机体的非特异性免疫应答。在急性低氧胁迫下,肝胰腺、血淋巴与鳃组织中的LDH含量和总ATPase活力均显...     

白斑综合征病毒浙江分离株在动物模型克氏原螯虾组织中的分布

应用对虾白斑综合征病毒浙江分离株(WSSV-ZJ)人工口服感染实验动物模型克氏原螯虾,研究其在消化道组织和血淋巴细胞内分布及病理变化的特点。结果显示,在受感染濒死螯虾的胃、中肠和循环血淋巴中观察到大量病毒粒子,是病毒侵染的主要靶组织;此外,在肝胰腺组织的细胞中观察到少量病毒粒子。该病毒主要侵染结缔组织细胞、上皮细胞和循环血淋巴细胞等敏感细胞的细胞核。电镜和光镜观察及应用原位杂交检测表明,浙江株病毒粒子在螯虾体内的形态大小、分布特点和靶细胞组织的病理与其他地理株相似或相同。     

克氏原螯虾嗜水气单胞菌噬菌体的分离鉴定和应用

为分离获得致病性嗜水气单胞菌烈性噬菌体, 鉴定和研究其生物学特性, 为克氏原螯虾细菌性疾病的防治和治疗提供依据, 研究以患病克氏原螯虾分离到的致病性嗜水气单胞菌为宿主菌, 从湖泊水体中分离到多株噬菌体, 对其中一株烈性噬菌体Ph-0进行了生物学特性的分析, 包括噬菌斑形态的观察, 最佳感染复数的测定, 一步生长曲线的绘制, 热稳定性的测定等。结果显示, 噬菌体Ph-0的噬菌斑呈圆形, 边缘可见1 mm左右的半透明晕环; 其最佳感染复数为0.1 MOI; 一步生长曲线表明其潜伏期约20min, 裂解期持续约70min, 90min后为平台期; 噬菌体在0—40℃下活性无明显变化, 但是当温度高于50℃活性开始下降; 在pH 3—11的环境中活性良好, 具有耐酸耐碱的性质; 此外对紫外和氯仿极其敏感, 在处理数分钟后滴度下降明显。噬菌体治疗人工感染嗜水气单胞菌的克氏原螯虾试验结果表明, 分别采用注射和浸泡两种方法进行治疗, 保护率可分别达到66%和20%, 病理切片结果显示在使用噬菌体治疗之后, 克氏原螯虾的鳃、心脏和肝胰腺均得到不同效果的治疗, 总体效果良好。上述研究结果表明噬菌体Ph-0是一株裂解性较强, 裂解周期短的烈性噬菌体, 对感染嗜水气单胞菌的克氏原螯虾有一定的保护效果。     

饲料中黄曲霉毒素B1对克氏原螯虾幼虾生长、饲料利用和肝胰腺组织结构的影响

以含不同浓度黄曲霉毒素B₁(AFB₁)(0、10、100和1000μg/kg饲料)的4种饲料饲喂初始均重为(0.382±0.005) g的克氏原螯虾(Procambarus clarkii)幼虾42d,探讨AFB₁对克氏原螯虾幼虾生长性能、饲料效率和肝胰腺组织结构的影响。结果显示, 100和1000μg/kg毒素组幼虾的存活率、摄食率、终末体重、特定生长率和饲料效率均显著低于对照组, 10μg/kg毒素组与对照组无显著差异。10μg/kg毒素组幼虾肝胰腺碱性磷酸酶(AKP)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽转移酶(GST)活性和丙二醛(MDA)含量均与对照组无显著差异,超氧化物歧化酶(SOD)活性显著低于对照组。饲料AFB₁含量≥100μg/kg时显著影响了克氏原螯虾幼虾上述肝胰腺酶的活性。10μg/kg毒素组肝胰腺组织结构发生轻微变化, 100和1000μg/kg毒素组幼虾的肝胰腺表现出严重病变, R细胞数量减少而B细胞...     

安徽地区克氏原螯虾白斑综合征的诊断及朔源

[目的]诊断安徽地区养殖的克氏原螯虾发生疫情的病原,追踪感染源,为疫病的防控提供依据.[方法]采集病料,参照OIE推荐的套式PCR法检测白斑综合征病毒(WSSV).将病螯虾鳃丝组织研磨后离心,取上清液接种健康克氏原螯虾.透射电镜观察病原特征.综合流行病源学及病原检测,分析养殖地区的可能感染源.[结果]发病螯虾感染了WSSV,动物实验可见和发病螯虾相同的临床症状,证实该病原引起养殖螯虾发病.电镜观察可见典型的白斑综合症病毒颗粒.流行病学调查显示,水产颗粒膨化饲料和冷冻饲料甲壳类检测阳性.[结论]该地区养殖的克氏原螯虾近年爆发的疫病病原为WSSV,推断地区性克氏原螯虾WSSV的感染并流行与污染的饲料有关.     

对虾白斑综合征病毒新株型WSSV-CN-Pc的毒力研究

对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是一种能够感染虾类并且造成其大面积死亡的环状双链DNA病毒。WSSV有多种分离株,其毒力有所差异。从克氏原螯虾(Procambarus clarkii)中分离得到1株WSSV新分离株WSSV-CN-Pc,其毒力尚不清楚。本研究采用肌肉注射和经口注射的方法,以WSSVTW型作为阳性对照,分别对克氏原螯虾(P.clarkii)和罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)进行活体实验。实验结果显示:肌肉注射WSSV-CN-Pc和WSSV-TW的克氏原螯虾均在第6天出现100%的死亡;罗氏沼虾在肌肉注射WSSV-TW后未出现死亡,但在注射WSSV-CN-Pc后的第9天死亡率达100%。经口注射WSSV-CN-Pc和WSSV-TW的克氏原螯虾均在第16天出现100%的死亡;罗氏沼虾经口注射WSSV-CN-Pc后的第19天死亡率为100%,但注射WSSV-TW的实验组并未出现死亡。结果表明,对于克氏原螯虾,WSSV-CN-Pc具有和WSSV-TW相似的毒力,而对罗氏沼虾存在明显的毒力差异。提示克氏原螯虾是WSSV传播途径中的重要因素。     

饥饿胁迫对克氏原螯虾生理生化和肠道健康的影响

研究旨在探究饥饿胁迫对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)血淋巴生理生化指标、肠道组织病理和肠道微生态的影响.对克氏原螯虾进行为期28d的饥饿胁迫,分别于饥饿0、7d、14d和28d采集血淋巴和肠道样品.血淋巴生化分析结果表明,谷丙转氨酶(ALT)没有发生显著变化,血糖(GLU)水平随着饥饿时间延长逐渐...     

克氏原螯虾在舟山群岛永久性静水水体中的分布及其影响因素

为了解克氏原螯虾在永久性静水水体(水库和池塘)中的分布及其影响因素和它对两栖动物多样性的影响,于2008年5—8月,利用样线法与目视遇测法以及网捕法,对舟山群岛中的8个岛屿(岱山、六横、秀山、佛渡、桃花、虾峙、册子和普陀山)上的86个水库和池塘中的克氏原螯虾分布和影响其分布的因素进行了调查,调查的因素包括外来种牛蛙(Rana catesbeiana)、水体的面积、最大水深、水体周边植被的覆盖率、鱼的出现率、人口足迹以及当地蛙的密度和物种多样性。结果表明:1)83.7%的研究水体(72/86)有克氏原螯虾的分布,克氏原螯虾和牛蛙共同分布的水体占53.5%;2)克氏原螯虾的密度在各个岛屿上的分布是不均匀的;3)基于信息标准(AICc)的最小满足模型(Minimum Adequate Model)显示,克氏原螯虾的分布与水体的最大水深和牛蛙的密度呈正相关,而与其他因素没有关系。克氏原螯虾的入侵对舟山群岛永久性静水水体蛙类物种多样性的直接影响可能不大,但由于克氏原螯虾是牛蛙的重要食物,它的分布可能潜在地助长外来种牛蛙的密度。     

桂林地区克氏原螯虾对泽蛙蝌蚪的捕食

克氏原螯虾（Procambarus clarkii）已入侵我国江苏、湖北、江西、安徽等多个省（市）。为研究克氏原螯虾对其生境中主要两栖动物泽蛙（Rana limnocharis）的影响,我们于2006年5-6月对广西桂林地区自然生境中克氏原螯虾和泽蛙蝌蚪的数量和密度进行了调查,7月在室内进行了克氏原螯虾对泽蛙蝌蚪和饰纹姬蛙（Microhyla ornata）蝌蚪的捕食实验。野外调查结果表明克氏原螯虾的密度与泽蛙蝌蚪的密度呈显著负相关。室内实验结果表明克氏原螯虾对泽蛙蝌蚪的捕食强度与克氏原螯虾体长呈显著正相关,且对泽蛙蝌蚪的捕食强度高于饰纹姬蛙蝌蚪。表明克氏原螯虾对两栖类幼体有比较严重的危害,应加强监测,采取相应措施预防和控制其危害。     

稻虾田黄鳝的食物组成及其对克氏原螯虾捕食强度研究

文章研究了稻田黄鳝(Monopterus albus)天然饵料生物资源、稻田黄鳝对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)捕食选择及不同投喂策略下黄鳝对克氏原螯虾的捕食强度,旨在为构建与优化稻-虾-鳝综合种养模式提供依据。结果表明,稻田中黄鳝天然饵料生物种类丰富,达16种(属);克氏原螯虾是黄鳝最喜猎物,其次为米虾,再次为蚯蚓和水生寡毛类;稻田黄鳝自然生长期间,其胃和肠前端食物团中,克氏原螯虾重量百分比均显著高于其他猎物,其中8月份占比最大,达93.90%, 4月份占比最小,为76.85%;当克氏原螯虾为唯一食物时,每尾大规格成鳝(≥200 g)日均捕食量为(1.63±0.065) g;当克氏原螯虾、米虾和蚯蚓作为食物时,黄鳝主要捕食克氏原螯虾且不捕食蚯蚓,对三者的选择指数分别为0.066、–0.266和–1;若以克氏原螯虾、鱼糜-饲料为食物时,黄鳝主要摄食鱼糜-饲料,极少捕食克氏原螯虾,对两者的选择指数分别为–0.846和0.591。     

家蚕蛹表达的重组Vp28疫苗对克氏原螯虾免疫反应的影响

将含有对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白Vp28基因的重组杆状病毒HyNPV-Vp28感染家蚕(Bombyx mori)蛹,配制成药饵持续口服免疫克氏原螯虾35天后,螯虾血细胞的吞噬百分比和吞噬指数比对照组显著提高(P＜0．05);血清中的抗菌活力、溶菌活力、酚氧化酶活性、超氧化物歧化酶活性以及血清和肝胰腺组织中的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶活性均显著提高(P＜0．05)。免疫35天后进行口服攻毒,20天内rVp28疫苗组的累积存活率达66．67%,与对照组和对照蚕蛹组比差异显著(P＜0．05),PRP分别达64．29%和58．33%。rVp28疫苗组存活虾的胃、肠、鳃、甲壳下上皮和肝胰腺等病毒侵染的靶组织进行组织病理检测均无病毒感染,DIG标记核酸探针斑点杂交和PCR检测也呈阴性反应;而试验濒死虾的组织都呈现典型的病变特征,病毒DNA检测均为阳性反应。本研究表明,口服免疫家蚕蛹表达的囊膜蛋白Vp28具有增强螯虾机体免疫功能的作用,对应用免疫措施预防对虾的病毒性疾病具有重要意义。     

家蚕蛹表达的重组Vp28疫苗对克氏原螯虾的抗病毒保护效应

The vaccine made of recombinant envelope protein (rVp28) of white spot syndrome virus (WSSV) expressed in silkworm (Bombyx mori) pupae using a baculovirus vector was used to investigate the efficacy of oral administration on WSSV disease resistance of Procambarus clarkii. Vaccine was mixed with diet at a ratio of 2% (w/w), and Procambarus clarkii were orally administered throughout 75 days. Vaccination with rVP28 showed the significantly higher cumulative survival compared with positive and negative control (P < 0.05) following an oral challenge on the 35th day post-vaccination (dpv), with PRP values 54.16% and 59.26%, respectively. rVP28 induced higher resistance via IM (intramuscular) injection challenge with WSSV stock, with PRP value of 46.12% and 49.99%, respectively. The survivors were subsequently re-challenged on the 55th dpv. rVP28 induced the significantly higher resistance to oral re-challenge (P < 0.05), with both PRP values 55.80% and 63.16%, respectively. rVP28 induced higher resistance to IM injection re-challenge, with both PRP values 31.25%. A DIG labeled WSSV DNA probe was used to detect WSSV by in situ hybridization. The positive cells were observed in epithelial cells of stomach, hepatopancreas and gut of the infected control crayfish, while negative reaction were observed in the tissues of survivors-vaccinated. These results indicated that vaccination of crayfish with recombinant protein had significant effect on oral infection, and had higher resistance against intramuscular injection challenge. This suggested the protection against WSSV could be induced in crayfish by recombinant protein rVp28 expressed in silkworm pupae.     

家蚕蛹表达的重组Vp28疫苗对克氏原螯虾的抗病毒保护效应

对虾白斑综合症病毒(WSSV)的致病性强、危害性大、地域分布和宿主范围广泛,目前还不能有效地控制疫情。将含有WSSV囊膜蛋白Vp28基因的重组杆状病毒HyNPV-Vp28感染家蚕(Bombyx mori)蛹,对发病蚕血淋巴进行SDS-PAGE和Western blotting分析,结果表明Vp28在家蚕体内得到了表达。将重组病毒囊膜蛋白rVp28疫苗配制成药饵,持续口服免疫75天,对克氏原螯虾进行预防WSSV,实验虾分为2%重组Vp28疫苗、2%普通蚕蛹组织匀浆(阳性对照)和普通饵料(阴性对照)3个处理组。免疫35天后进行口服攻毒,20天内rVp28疫苗组的累积存活率为63.33%,与阳性和阴性对照比差异显著(P<0.05),PRP分别达54.16%和59.26%;注射攻毒后20 天内rVp28疫苗组的累积存活率与阳性和阴性对照组比差异不显著(P>0.05),PRP分别为46.12% 和49.99%。第55天对存活虾再口服攻毒,20天内rVp28疫苗组与阳性和阴性对照组比累积存活率差异显著(P<0.05),PRP分别为55.80%和63.16%;二次注射攻毒后,rVp28疫苗组的PRP均为31.25%。对vVp28疫苗组存活虾的胃、肠和肝胰腺组织进行病毒的原位杂交检测均呈阴性反应,而对照组死亡虾组织都呈阳性反应。本研究表明,口服免疫家蚕蛹表达的病毒囊膜蛋白Vp28能诱导螯虾产生抗病毒保护作用,对应用疫苗预防对虾的病毒性疾病具有重要意义。     

罗氏沼虾源维氏气单胞菌的分离鉴定、毒力基因检测及组织病理学观察

为鉴定江苏省高邮市某养殖场罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)发病死亡的病原体,研究从患病濒死的罗氏沼虾肝胰腺中分离出一株优势菌WSQ-1,对其进行纯化培养、革兰氏染色、生理生化特征鉴定、16S rRNA及gyrB基因序列分析,鉴定为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)。回归感染实验表明,分离株WSQ-1对罗氏沼虾有较强致病性,且出现与自然发病类似的症状:感染虾活力减弱,食欲下降,肌肉发白; 72h半致死浓度(LD50)为2.51×10⁶ CFU/mL。组织病理学观察可见其肝胰腺组织病理损伤,并随感染浓度的增加或感染持续时间的延长而逐渐加重:低浓度或感染前期结缔组织间隙增大并积聚少量炎性细胞;继而肝小管管腔变形,肝细胞空泡化,部分组织坏死;高浓度或感染后期肝小管及结缔组织大面积坏死导致不可逆损伤。毒力基因检测显示该菌携带Acsv、AexT、Act、Aer、GcaT、Acg和OmpAI共7个毒力基因,表明分离菌具有较强致病性。药敏试验显示,该分离菌对头孢哌酮等16种药物敏感,对克拉霉素等10种药物耐药,仅对卡那霉素表现为中度敏...     

Responses of giant freshwater prawn (Macrobrachium rosenbergii) to challenge by two strains of Aeromonas spp

The virulence of two Aeromonas strains (A. veronii and A. caviae) isolated from the hepatopancreas of apparently healthy giant freshwater prawns (Macrobrachium rosenbergii) was compared using a challenge by injections. For the A. veronii strain, challenge with 3.7 x 10(5) cells/g of body weight led to 100% mortality; for the A. caviae strain, 3.8 x 10(6) cells/g produced 100% mortality. The 50% lethal doses (LD50) were 2.0 x 10(3) cells/g for A. veronii and 51.2 x 10(3) cells/g for A. caviae. Use of different culture media (trypticase soy broth vs prawn muscle extract) did not significantly affect the virulence of A. veronii. Injection of a sublethal dose (1 x 10(3) cells/g) of A. veronii led to a significant decrease in the total hemocyte count (THC) between 4 and 24 h after injection. Saline injections also caused a similar though less decrease in THC. In the first 24 h after injection of A. veronii (1 x 10(3) cells/g), the change in the percentages of granulocytes (both granular cells and semigranular cells) in the hemolymph was significantly different. After a significant initial increase, the percentage of hyaline cells fell by a factor of 4, from 9 to 2%. Phenoloxidase activity increased fourfold immediately after injection and returned to preinjection levels at 24 h.     

Characterization of the microsomal mixed-function oxygenase system of the hepatopancreas and green gland of the red swamp crayfish, Procambarus clarkii

1. The microsomal mixed-function oxygenase (MFO) system from the hepatopancreas and green gland of the red swamp crayfish, Procambarus clarkii has been characterized with respect to the constitution of electron transport proteins and the ability to catalyze the metabolism of xenobiotics. 2. Cytochrome P-450 content of hepatopancreas microsomes was approximately 10-fold higher than that of green gland and comparable to that of rat liver. NADPH-cytochrome c reductase activity in hepatopancreas microsomes was approximately 2% of that found in rat liver microsomes. 3. Green gland microsomes catalyzed higher turnover rates of aminopyrine N-demethylase and benzo[a]pyrene hydroxylase than hepatopancreas microsomes. With hepatopancreas microsomes, organic hydroperoxides supported a greater rate of aminopyrine N-demethylation than did NADPH plus O2. 4. P. clarkii hepatopancreas microsomes generally displayed a lower binding affinity (Ks) for a number of type I and type II ligands than did rat liver microsomes.     

克氏原螯虾Rab5、Rab6蛋白及其抗体对血淋巴细胞吞噬活性的影响

为研究克氏原螯虾(Procambarus clarkii)Rab5(PcRab5)和Rab6(PcRab6)的生物学功能, 利用同源重组技术构建了克氏原螯虾pET-B2m-PcRab5和pET-B2m-PcRab6原核表达载体, 并进行了诱导表达和多克隆抗体的制备, 采用ELISA和Western Blot技术检测了抗体效价和特异性。将PcRab5和PcRab6的原核表达蛋白和多克隆抗体注射到健康克氏原螯虾体内, 研究了其对血淋巴细胞吞噬活性的影响。实验结果表明构建的pET-B2m-PcRab5和pET-B2m-PcRab6原核表达载体经诱导后可表达目的蛋白, 分子量均为67 kD, 纯化后蛋白条带单一, 纯度较高。重组表达纯化后的PcRab5和PcRab6蛋白免疫日本大耳兔分别获得效价为1:2048 K和1:512 K的兔抗血清, 制备的抗体可分别特异性识别PcRab5和PcRab6蛋白。将PcRab5和PcRab6蛋白注射健康克氏原螯虾后, 其血淋巴细胞中可吞噬荧光微球的细胞比例分别显著上升至38%和30%(P＜0.01)。而将纯化的PcRab5和PcRab6多克隆抗体分别注射至螯虾体内后, 其血淋巴细胞的吞噬细胞比例均出现显著下降(P＜0.05), PcRab5和PcRab6蛋白参与了血淋巴细胞吞噬功能。实验为进一步研究克氏原螯虾PcRab5和PcRab6分子功能奠定基础, 也可为理解甲壳动物Rab5和Rab6在血淋巴细胞吞噬功能中的作用提供帮助。     

克氏原螯虾一种新型甲壳素基因的鉴定和抑菌功能研究

抗菌肽是无脊椎动物非特异性免疫系统中重要的免疫因子,抗菌肽具有良好且广谱的抗菌活性,并且不易产生耐药性,有望替代传统抗生素药物发挥功能.甲壳素(Crustin)是目前甲壳类动物中研究比较广泛的一类抗菌肽家族.研究鉴定了来自克氏原螯虾(Procambarus clarkii)中的一种新型Crustin基因,命名为Pc-C...