用于老年人的生长激素

如果六月第一周公布的结果被确认的话,帮助缓解一些老化作用可能成为人生长激素(hGH)一种主要的新用途.曾经有人怀疑老年人中生长激素分泌的减少在降低瘦体重增加脂肪组织量和皮肤变薄中起很大作用.此新研究结果表明,服用生长激素可逆转上述过程. 科学家认为从30岁左右开始,多数个体中垂体生长激素的分泌趋于减少.由于没有实测hGH含量,因而不能确定上述假说,但代替实测hGH,通过测定胞浆的胰岛素样生长因子I(IGF-Ⅰ,或促生长因子C)浓度间接测定了hGH,IGF-Ⅰ由肝脏及其它与     

两个人生长激素基因在SV40病毒重组体感染的猴细胞中的表达

我们已经建造了带有两个不同的人生长激素(hGH)基因的SV40重组体。用这些重组体感染的猴肾细胞能合成、加工并分泌人生长激素。有着与克隆的人生长激素互补DNA(eDNA)同样编码序列的基因1,共产物从几个标准来看,与垂体hGH没有什么区别。预定编码一个变异蛋白质的基因2,其产物比垂体hGH的免疫反应活性要小,但能有效地与hGH细胞表面受体结合。这些结果表明,基因2有可能表达而产生我们以前未辨别的hGH形式。这些结果显示了在真核细胞中,用基因转移的方法产生成熟的激素是可能的。这些结果也证明了SV40—猴细胞系统可以用于生产和鉴定动物细胞分泌的蛋白质。     

人生长激素(hGH)对SARS和AIDS疾病的潜在应用前景

一、人生长激素(hGH)简介 人生长激素是人脑垂体前叶分泌的一种蛋白质激素,由191个氨基酸残基组成,分子量为22 000道尔顿。它的主要生理功能是促进人体生长发育(如果缺乏就会产生侏儒症)和维持组织器官的正常功能(如果严重缺乏会造成组织器官萎缩和功能衰     

发现绵羊垂体分泌的新激素——促肾素

现在已清楚许多激素,包括生长激素、促肾上腺皮质激素、胰岛素、雄激素、甲状腺素、糖皮质激素和盐皮质激素,在增加器官重量、RNA和蛋白质合成、DNA合成和有丝分裂活性以及鸟氨酸脱羧酶活性方面能促进肾生长。除了这些促进肾生长的激素以外,Nicholson等证明,还有一种绵羊垂体分泌的多肽片断能促肾增大,其依据是这一因子能增加经阉割并切除垂体的大鼠肾重量。经生化分析这一多肽片断主要由LH组成,不含生长激素、促肾上腺皮质激素、γ-促脂解激素、加压素和催乳素,而仅含少量的TSH和FSH。每天给切除垂体的大鼠注射生长激素、促肾上腺皮质激素、催乳素、TSH和FSH都不能刺激肾生长。为了解答垂体分泌的促肾素(renotropin)活性是否归因于LH内在活性的疑问,Nicholson等检测了     

活化素抑制大鼠垂体GH_3细胞中人生长激素基因启动子的活性

本研究旨在探讨活化素(activin)对大鼠垂体GH3细胞中人生长激素(hGH)基因启动子活性的影响及其可能的调节机制。采用荧光素酶报告基因方法。首先建立含hGH基因启动子(-484～+30bp)和荧光素酶融合基因的稳定转染GH3细胞株,然后加入活化素或同时加入活化素与相关信号转导途径的激动剂,通过检测细胞培养液和细胞裂解液中GH的含量,以及GH3细胞内荧光素酶的变化,反映活化素对GH分泌、合成和hGH基因启动子活性的影响。将含不同长度hGH基因启动子序列的荧光素酶表达质粒分别转染GH3细胞,观察它们对活化素的反应,寻找活化素影响hGH基因启动子活性的关键DNA序列。结果表明,活化素(5,50nmol/L)能抑制大鼠垂体GH3细胞中GH的分泌和合成,活化素(5,50nmol/L)还能够抑制GH3细胞中hGH基因启动子的活性,使之仅达对照组的77%和69%;在胞内信号转导激动剂中,丝裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK/MEK)特异性激动剂C6ceramide(1μmol/L)完全取消了活化素对hGH基因启动子活性的抑制作用;活化素发挥抑制作用所需要的hGH基因启动子关键序列位于-132～-66bp之间。上述研究表明,活化素能抑制大鼠垂体GH3中hGH基因启动子的活性,它可能是通过抑制细胞内依赖MAPK的信号转导途径来完成的,同时hGH启动子上-132～-66bp的序列在其中发挥重要的作用。     

家蚕促前胸腺激素与胰岛素同源——昆虫脑激素研究的最新进展

1984年12月在《科学》(Science,226:1344)杂志上发表了日本东京大学农业化学系长泽宽道博士等人的论文“家蚕促前胸腺激素氨基端氨基酸顺序:与胰岛素同源”。文章写到,能激活内分泌器官前胸腺并使其合成和释放蜕皮素的脑激素——促前胸腺激素(PTIH)已经从家蚕蛾头内提取纯化出来。它包括两类分子量不同的激素,22 K PTTH(分子量～22,000)和4K PTTH(分子量～4400),4 K PTTH有三种4 KPTTH-Ⅰ,-Ⅱ和-Ⅲ。它们氨基端的19个氨基酸顺序已经排定(图A)。     

小鼠胎盘催乳素样蛋白质为异源性糖基化蛋白质

小鼠胎盘催乳素样蛋白质(分子量34000),依其生物学功能又称为促细胞分裂调节蛋白(MRP),与垂体催乳素、胎盘催乳素和生长激素是一类异源性糖基化蛋白质,有氨基酸序列的结构相关性。垂体前叶细胞分泌的催乳素和小鼠胎盘或体外培养中3T3细胞的 MRP 及其 mRNA 水平,可因细胞对肽生长因子的选择性反应面增高。细胞溶酶体融合新合成的蛋白质,由溶酶体酶降解 MRP,而调节3T3细胞     

生长激素/胰岛素样生长因子1与阿尔茨海默病

生长激素／胰岛素样生长因子-1（GH／IGF-1）轴的合成、分泌、调节及生物学活性与阿尔茨海默病（AD）有密切关系。生长激素（GH）的合成和分泌受生长激素释放激素（GHRH）正向调节。GH／IGF-1轴活性下降导致一系列生理功能变化。GH／IGF-1缺乏可引起衰老及神经退行性变（AD）而导致认知功能的下降,相应激素的补给可以抑制或逆转这种认知障碍。越来越多的证据表明：GH／IGF-1参与AD型痴呆病理过程,对AD有很好的治疗应用前景。本文就生长激素／胰岛素样生长因子1在AD发病中的机理和药理学研究做一综述。     

人造激素已用于人体临床实验尿激酶细菌合成获得成功

初步材料证明,细菌制造的人生长激素具有天然产品的生物活性,但其活性还不及天然产品那样高,1980年在基因工程历史上细菌合成的人生长激素第一次注入到人体中,这是在英国伦敦出现的事,开始在健康人身上实验人造胰岛素(SN;118(4):53)这种胰岛素很有效地使血糖水平降低。以后继续在糖尿病患者进行类似的实验,可以预     

人造激素已用于人体临床实验尿激酶细菌合成获得成功

初步材料证明,细菌制造的人生长激素具有天然产品的生物活性,但其活性还不及天然产品那样高,1980年在基因工程历史上细菌合成的人生长激素第一次注入到人体中,这是在英国伦敦出现的事,开始在健康人身上实验人造胰岛素(SN;118(4):53)这种胰岛素很有效地使血糖水平降低。以后继续在糖尿病患者进行类似的实验,可以预     

重组人生长激素促进身高矮的健康人长高

东京女子医科大学教授镇目和夫、助教授高野加寿惠等将人生长激素(hGH)投予身体健康但身高较矮小的儿童(正常矮个)(参阅本刊1987年4月6日号),确认有促生长的作用。试验结果已于1987年6月3～5日在京都召开的日本内分泌学会上发表。高野等首先测定了35例正常矮个血中24小时内 GH 平均浓度。得知其中12例是每毫升含量在3纳克以下,1天的生理性的 GH 分泌量少的生长激素神经分泌机能障碍(GH neuro-secretory dysfunction,GHND,即生长激素分泌不全)。接着对这35例中愿意接受 hGH 的24例,以千克体重每天0.1国际单位的量,连续6个月投予 N 末端没有蛋氨酸的天然型 hGH。     

豚鼠生长激素受体及其突变体在哺乳动物细胞中的功能性表达

采用RT PCR克隆得到豚鼠生长激素受体cDNA。序列同源比较显示生长激素受体的一些功能性保守氨基酸在豚鼠生长激素受体中被其他氨基酸所取代。例如 ,哺乳动物生长激素受体中保守的第 170位组氨酸和第 333位酪氨酸分别是受体二聚化和生长激素刺激蛋白质合成及脂生成所必需的 ,但在豚鼠生长激素受体中分别被酪氨酸和丝氨酸所取代。为此 ,采用定点突变法得到了突变体gpGHRY16 8H和 gpGHRS332Y ,并构建了表达质粒 pcDNA3 gpGHR ,pcDNA3 gpGHRY16 8H和pcDNA3 gpGHRS332Y。借助COS 7和CHO细胞 ,研究了豚鼠生长激素受体及其突变体的生物活性。实验表明转染了pcDNA3 gpGHR的COS 7细胞对牛生长激素具有高亲和性 [Ka=1.3× 10 9(mol/L) -1],并且用鼠抗生长激素受体单克隆抗体mAb2 6 3可检测到一分子量约 92kD的蛋白质。在CHO细胞中 ,虽然两个氨基酸的定点突变不影响受体与配体的结合 ,但都提高了生长激素刺激的蛋白质合成而降低生长激素刺激的脂肪生成。蛋白质印迹实验揭示突变体 gpGHRY16 8和gpGHRS332Y分别降低和提高了生长激素诱导的JAK2酪氨酸磷酸化。因此 ,报道了豚鼠生长激素受体在生长激素代谢功能中的调节作用以及受体中保守氨基酸的取代导致配体结合后信号转导的变化。     

激素和活性多肽

961386 利用有效的表达载体系统高水平表达重组火鸡促乳素和生长激素[会,英]/Foster, L.K.…//Foult.Sci.-1995,74,Suppl.1.-68[译自DBA,1995,14(22),95-13049] 采用了含有新霉素抗性选择标记基因和Har-MuSV长末端重复启动子的表达载体调控火鸡促乳     

人生长激素慢病毒载体的构建及其在鼠骨骼肌成肌细胞中的表达

构建能表达人生长激素(hGH)的pLentivirus6/V5-hGH载体,并实现hGH基因在骨骼肌成肌细胞中大量、长期和稳定的表达。体外培养SD鼠骨骼肌成肌细胞,并通过免疫组织化学方法鉴定所得细胞、用台酚兰染色确定培养细胞的活性并绘制生长曲线。将目的基因hGH亚克隆到真核细胞表达载体pLenti6/V5-D-TOPO载体上,构建重组质粒pLentivirus6/V5-hGH。将pLenti6/V5-hGH及阳性对照质粒pLenti6/V5-EGFP分别用Lipofectamin2000介导转染体外培养的SD乳鼠骨骼肌成肌细胞。在激光共聚焦扫描显微镜下计数,确定阳性对照质粒的转染数,从而估计该基因的转染效率。加入筛选试剂以获得稳定表达异源生长激素(GH)的成肌细胞。收集转染及筛选后的细胞培养基,用放射免疫分析法(RIA)检测重组人生长激素(rhGH)的表达水平。聚合酶链式反应法(PCR)及DNA测序显示hGH基因成功地插入到pLenti6/V5-D-TOPO载体中;阳性对照质粒转染细胞24h后,在激光共聚焦显微镜下观察,其转染效率达40%以上。检测收集的上清,与对照组相比,有极显著差异(P<0.01),观察至第8周,rhGH仍持续稳定表达。通过检测培养的chang-liver肝细胞上清中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的水平,验证了rhGH的生物学活性。实验通过培养高纯度的成肌细胞,构建了能在真核细胞内表达hGH的重组质粒pLenti6/V5-hGH,实现了hGH基因在骨骼肌成肌细胞中大量、长期和稳定的表达,并且获得的rhGH具有较强的促进肝细胞分泌IGF-1的能力。     

细胞因子对GH3细胞中人生长激素基因表达的影响

为了研究细胞因子IL 11、睫状神经营养因子 (CNTF)和转化生长因子 (TGF β)对大鼠垂体GH3 细胞中人生长激素 (hGH)的基因启动子活性的影响及其与垂体特异性转录因子Pit 1蛋白的关系 ,首先建立含hGH基因启动子 (- 4 84～ 30bp)和荧光素酶融合基因的稳定转化GH3 细胞系 ,然后用细胞因子刺激 ,检测细胞培养液和细胞裂解液中GH的含量 ,反映它们对GH分泌和合成的影响 ;检测GH3 细胞内荧光素酶的变化 ,说明细胞因子对hGH基因启动子活性的作用。将Pit 1蛋白表达质粒 (pcDNA pit 1 cDNA)单独转染或与Pit 1反义寡核苷酸 (Pit 1OND)共转染于稳定转化的GH3 细胞中 ,观察加入细胞因子后荧光素酶的变化 ,探讨细胞因子的作用与Pit 1蛋白的关系。结果表明 ,IL 11(2 0nmol/L)、CNTF(10nmol/L)能刺激大鼠垂体GH3 细胞中GH的分泌和合成 ,增强GH3 细胞中荧光素酶的表达 ,分别增加到对照组的 12 6 %、136 %。TGF β(5nmol/L)能减少GH的分泌和合成 ,抑制荧光素酶的表达到对照组的 77%。Pit 1蛋白过表达和表达被抑制对细胞因子的调节作用没有影响。这说明IL 11、CNTF和TGF β可通过调节大鼠垂体GH3 细胞中hGH基因启动子活性影响GH的合成 ,Pit 1蛋白可能不参与这些调节作用。     

非天然氨基酸及非天然蛋白合成的研究进展

非天然氨基酸是天然氨基酸的衍生物,其具有重要的生理和药理功能.由非天然氨基酸合成的非天然蛋白同样具有特别的功能与活性.非天然氨基酸插入蛋白质中的研究为新型生物材料和蛋白质药物等的合成和应用提供了新的指导方向.基于此,本文综述了非天然氨基酸的生物合成方法,分析了非天然氨基酸生物合成目前存在的难点,总结了非天然氨基酸插入蛋...     

棕点湍蛙皮肤分泌液中促胰岛素释放肽的分离纯化、基因克隆及活性分析

通过分离纯化棕点湍蛙(Amolops loloensis)皮肤分泌液中的生物活性物质,得到有促胰岛素释放活性的分离峰,并鉴定其结构.采用葡聚糖Sephadex G-50凝胶层析和反相高效液相(RP-HPLC)等手段对棕点湍蛙皮肤分泌液进行分离纯化,利用胰岛素释放实验进行活性检测,Edman降解法测定活性峰的氨基酸序列,反转录法构建cDNA文库并克隆其基因.得到一个具有显著的促胰岛素释放活性的十六肽,测得其氨基酸序列为:FMPIvGKsMSGLSGKL-NH2,命名为amolopin-1.由cDNA(开放阅读框为192bp)推导的氨基酸一级结构显示,其前体由64个氨基酸残基(aa)组成,包括高度保守的信号肽(22aa),酸性肽以及成熟肽.经过数据库序列比对,从棕点湍蛙皮肤中得到一个新的促胰岛素释放肽,进一步分析其作用机理和药代动力学,极有可能得到一个新的治疗糖尿病的降糖药物.     

IGF-Ⅰ对卵巢的作用及其调节

IGF-Ⅰ能刺激卵泡颗粒细胞的代谢、增生、分化,甾体激素的生成及受体的诱导。卵泡内IGF-Ⅰ的分泌受促性腺激素,雌二醇及卵泡大小的调节。 1976年Rinderknecht和Humbel从血清中具有胰岛素样活性但不同胰岛素抗体反应的物质中分离出两种肽类,由于这两种肽类是依赖于生长激素,并具有促进生长的特性,因此被定名为胰岛素样生长因子(Insulin-like growth factor,简称IGF)。IGF又由于其组成肽类的氨基酸不同而被皮分为IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ。IGF-Ⅰ分子量约7000道尔顿,包括70个氨基     

胰岛素样生长因子-1对血管平滑肌细胞PI3K/PTEN信号通路的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)促血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的细胞内信号转导机制.方法:体外培养的兔血管平滑肌细胞分3组处理,以细胞计数、噻唑盐比色法测定细胞增殖能力,以磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)特异性抑制剂渥漫青霉素(WT)孵育细胞间接反映PI3K作用.Western Blot定量磷酸酶PTEN表达水平,免疫沉淀、特异底物diC16PIP3绿色试剂法测定PTEN脂质磷酸酶活性.结果:IGF-1(100 μg/L)使细胞计数及MTT 比色A值分别增加至对照组的2.8倍和3.8倍,WT抑制VSMC增殖,并完全逆转IGF-1的作用(均P<0.01).各浓度IGF-1对PTEN蛋白表达水平无明显影响,其对PTEN活性的抑制呈浓度(10～100 μg/L)及时间(3 min～24 h)依赖性(均P<0.01).结论:IGF-1促VSMC增殖作用与活化PI3K蛋白激酶的促生长活性及抑制PTEN脂质磷酸酶的负性调节细胞生长作用有关.     

通过基因治疗调节人生长激素和胰岛素的分泌

美国加利福尼亚-旧金山大学(San Francisco, CA)的研究者通过遗传操作使大鼠的外分泌细胞生成胰岛素和人生长激素(hGH),并运送到血流中.这些科学家们预告说,这项技术有可能替代为补充这两种蛋白而进行的连续注射.