轮状病毒RNA分离及其制备技术

轮状病毒是引起流行性腹泻的重要病原之一。分析研究该病毒RNA,从理论探讨、病原发现和疾病的防治研究等方面都颇有价值。我们参照有关文献[1—4],并作了某些改进,应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离轮状病毒RNA和硝酸银染色,取得了良好的分辨效果。洪涛等用此方法研究了成人腹泻轮状病毒;     

聚丙烯酰胺凝胶电泳脂蛋白带的耐尔氏蓝染色法

目前聚丙烯酰胺凝胶电泳用考马斯亮蓝G或R染蛋白带、用过碘酸-Schiff试剂染糖蛋白带,均取得了满意的结果.至于用油红(OR)、苏丹黑(SB)对琼脂、醋酸纤维膜等凝胶中的脂蛋白带的染色鉴定是成功的,但对聚丙烯酰胺凝胶中的脂蛋白带的染色则不够满意.我们应用耐尔氏蓝[Nile’s blue] 染色法染盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的脂蛋白带取得了较好的结果.现介绍如下:     

沙冬青cDNA-AFLP银染和条带回收方法分析

通过比较而获得沙冬青cDNA-AFLP银染和条带回收的最佳方法.银染时采取Bassam法和Sanguinetti法,凝胶条带回收时利用直接回收法、试剂盒法、LiCl高盐法和聚丙烯酰胺凝胶高效回收法.比较不同方法对于开展聚丙烯酰胺凝胶电泳的影响.采用Bassam银染法对获得的扩增产物进行染色后无法得到差异显示条带,而利用Sanguinetti银染法显色后可观察到比较明显的差异表达条带;以直接回收法、PAGE试剂盒法、LiCl高盐法对差异条带进行回收后,二次PCR无法得到扩增产物,采用聚丙烯酰胺凝胶高效回收法后则可获得比较清晰的二次扩增产物.Sanguinetti银染法和聚丙烯酰胺凝胶高效回收法是应用于本研究的最佳方法.     

一种利用普通垂直电泳槽回收PAGE胶蛋白条带的简便方法

植物总蛋白样品经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离之后,直接用考马斯亮蓝染色、切胶回收目的条带,再用聚丙烯酰胺凝胶电泳槽电洗脱纯化得到单一条带的目的蛋白.此法可得到有活性的黄瓜衰老叶片中被特异激活的DNA酶,对样品中含量少,特别是与其他分子量相近的蛋白质十分有效.     

牦牛血超氧化物歧化酶电泳多谱带现象研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳、线性梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳、制备电泳、等电聚焦电泳以及不同试剂处理等多种方法对牦牛血铜锌超氧化物歧化酶电泳多谱带现象进行了研究。结果表明在不同的实验条件下,各带会发生相互转化。该多谱带现象是由聚合和构象异构体两种原因造成。     

防止SDS-聚丙烯酰胺凝胶平板电泳中出现的异常现象

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳灵敏度高,分辨率高,广泛应用于医学,生物化学,分子生物学,免疫,遗传工程等方面.它要求有严谨的操作技术,在电泳过程中如某个环节掌握得不好,就很难得到理想的结果.下面介绍几年来我们在进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时常出现的一些异常现象以及预防的措施. 1.样品处理时,通常是用Ttis-HCI pH6.8的缓冲液,要使样品均一的进入分离胶,必须确保缓冲液有精     

一种具有抑制糜蛋白酶活性的血清DNA结合蛋白质的纯化和理化特性

 本文采用离子交换层析,DNA亲和层析和硫酸铵盐析三步从人血清中分离纯化了一种肿瘤相关DNA结合蛋白质(64DP)。本方法较简便,产率提高。经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫电泳鉴定纯度符合要求。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量为64,000。等电聚焦电泳测得等电点在4.2左右。醋酸纤维膜电泳和转移电泳表明其为一种α_1球蛋白。过碘酸西夫氏糖蛋白染色呈阳性反应。氨基酸分析和酶抑制试验证实64DP与α_1抗縻蛋白酶很相似。     

LDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析植物过氧化物酶同工酶

以高粱和甘蓝型油菜叶片为材料,用十二烷基磺酸锂不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳（LDS-PAGE）检测过氧化物酶同工酶的结果表明,LDS-PAGE的酶带条数比非变性不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳（native PAGE）明显增加,分辨率大大提高,上样量少,胶片易保存;比复性电泳（G-PAGE）的步骤简单,电泳后无需除去LDS即可直接按常规活性染色方法染色。     

晚疫病菌基因组SSR扩增产物两种检测方法的比较与改进

以32份马铃薯或番茄晚疫病菌基因组DNA为模板,分析了琼脂糖凝胶电泳法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法对10对SSR引物多态性检测的影响,同时比较了聚丙烯酰胺凝胶电泳两种银染法(常规银染法和快速银染法)的差异。结果显示,聚丙烯酰胺凝胶电泳较琼脂糖凝胶电泳分离效果好,具有更高的多态性检出率,其中快速银染法与常规银染法的检出结果相同,但常规银染步骤繁琐,整个过程要用1-2h,而快速银染只需约15min,且染色背景较浅,条带清晰。聚类分析显示,聚丙烯酰胺凝胶电泳快速银染法可将供试晚疫病菌株分布于更多的聚类组,显示出更高的遗传变异度。可见,聚丙烯酰胺凝胶电泳快速银染法结合SSR分子标记技术,可有效地用于马铃薯或番茄晚疫病菌群体遗传多样性分析。     

蛋白质组学实验中聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝染色

在蛋白质组学实验中,蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳后的染色是一个十分重要的环节。鉴于其良好的质谱兼容性和操作上的便捷,考马斯亮蓝染色是目前众多实验室中最常用的染色方法。本文介绍了四种各具特色的考马斯亮蓝染色方法。     

家养水牛30个微卫星标记的多重PCR体系建立及其多态性检测

利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结合硝酸银染色方法, 从30个微卫星标记中筛选出9组多重PCR体系, 其中4组三座位组合, 5组二座位组合; 在此基础上进一步检测了这些标记在中国海南兴隆水牛中的遗传变异性。结果显示其中26个标记具有多态性, 而其余4个标记(CSSM045, ILSTS008, RM099和HMH1R)为单态, 群体平均等位基因数4.7, 平均期望杂合度为0.534。所筛选出的多重PCR组合为家养水牛的群体遗传多样性 检测和亲子鉴定等研究提供了技术基础。     

一种利于蛋白质回收的快速SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色-脱色方法

在实践基础上摸索出一种快速并有利于蛋白质回收的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色-脱色方法：经常用的考马斯亮蓝R-250染色液短暂染色后直接用250 mmol/L KCl溶液脱色.这种方法染色-脱色的清晰程度与常规的染色-脱色方法接近,而且能使蛋白质回收率提高三倍多.     

聚丙烯酰胺凝胶电泳

电泳是分离混合物中离子成分的最有效方法之一。以聚丙烯酰胺凝胶作支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳。这种电泳方法分辨率高,灵敏度大,重复性强,并且操作简便,因此广泛应用于分子生物学,生物化学,细胞学,免疫学,酶学等学科的研究,近年来在微生物分类上的应用也逐渐引起人们的注意。例如1968年     

多糖和糖蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法的改进

对多糖聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）的缓冲系统进行了改进,尤其是多糖电泳后的染色方法的改进,得出一种操作简便、时间短、实验成本低的PAS染色法。     

防止SDS-聚丙烯酰胺凝胶平板电泳中出现的异常现象

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳灵敏度高,分辨率高,广泛应用于医学,生物化学,分子生物学,免疫,遗传工程等方面。它要求有严谨的操作技术,在电泳过程中如某个环节掌握得不好,就很难得到理想的结果。下面介绍几年来我们在进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时常出现的一些异常现象以及预防的措施。 1、样品处理时,通常是用Tris-HCl pH6.8的缓冲液,要使样品均一的进入分离胶,必须确保缓冲液有精     

聚丙烯酰胺凝胶电泳的快速脱色方法

以牛血清白蛋白为材料进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),凝胶固定后,用考马斯亮蓝R-250染色后比较传统脱色液(冰乙酸-甲醇溶液)和不同盐溶液(NACL、KCL、CUCL2)的脱色效果的结果表明:PAGE和SDS-PAGE胶,0.25和0.5MOL·L-1NACL,在70℃(PAGE)、50℃(SDS-PAGE)下脱色,约2￣4H,效果好,灵敏度高,背景低。     

聚丙烯酰胺凝胶快速、高效银染方法的建立

摘要: 聚丙烯酰胺凝胶电泳目前已经广泛应用在SSR标记、SNP标记以及遗传图谱的构建等过程中, 但是一直以来凝胶银染方法由于染色时间长、染色步骤繁琐, 使得对于开展大批量的实验研究极为不利。文章通过对常规方法的改良, 建立了一个银染步骤只需要10 min, 整个染胶过程只需约20 min的快速、高效的银染方法。     

华中五昧子AFLP反应体系的建立

目的:建立一个适于华中五味子研究用的AFLP反应体系.方法:以华中五味子硅胶干燥嫩叶为试材,采用改良CTAB法提取到高质量DNA.通过琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳对Mse I/EcoR Ⅰ双酶切、连接、预扩增和选择性扩增过程中的关键因素进行分析.结果:双酶切6 h,片段主要集中在250～2 000bp;连接产物和预扩增产物最适稀释倍数均为10倍;预扩增产物经选择性引物E-ACF/M-CAT和E-ACA/M-CAG扩增,琼脂糖电泳检测其主带分别集中在250～375 bp和500～750 bp,6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测及银染,条带清晰可辨.结论:该体系具有稳定性高、重复性好等优点,可用于华中五味子AFLP分析.     

直立平板式连续浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳

聚丙烯酰胺凝胶具有化学稳定性,透明度高,聚合体孔径可控制等性质,以及不存在非特异吸附和电渗作用等,因此聚丙烯酰胺凝胶电泳在分子生物学、生物化学、临床化学等学科的分析或分离方法中愈来愈占有重要地位。自Ornstein及Davis首先介绍了聚丙烯酰胺电泳法以来,无论在理论的深度和应用的广度上都有较大的发展,国内外均有专著。本文仅讨论直立平板式连续浓度梯度电泳,它的主要优点是分辨率高,同时由于在同一块凝胶板上可进行几个样品的电泳更便于比较和辨认,并可为进行双相电泳、分子量测定或制备电泳提供基础。     

一种有效的DNA序列测定方法

比较了单链和双链DNA(ss和dsDNA)模板和两种不同的聚丙烯酰胺凝胶电泳对DNA序列测定的影响。结果表明:在相同的条件下,ssDNA模板明显优于dsDNA模板;缓冲液梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳测定DNA序列的长度在40cm长的胶上可达350nt。而一般的线性聚丙烯酰胺凝胶电泳才可测150nt。对于基因组序列分析,采用单链DNA模板和缓冲液梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种有效的测定方法。