人参寡糖素M对红花培养细胞生长与α-生育酚形成的影响

人参寡糖素M能提高红花(Carthamus tinctorius)培养细胞的生长速率和培养细胞中代谢产物α-生育酚的含量。其最适作用浓度在愈伤组织培养中为5mg/L。在红花细胞悬浮培养加入人参寡糖素M1d后,培养细胞中α-生育酚的含量即提高,但由于累积效应,因而于细胞接种当天同时加入人参寡糖素M对细胞生长和α-生育酚含量的提高效果较好。加入人参寡糖素M可缩短红花悬浮培养细胞生长的延缓期,并于指数生长期作用最明显;另外可使细胞生长及α-生育酚积累同时提前达到最高值,因而缩短了细胞收获时间。     

植醇与寡糖对红花悬浮培养细胞的生长及α-生育酚积累的效应

在红花细胞悬浮培养基中加入α-生育酚的前体植醇能显著增加α-生育酚的积累,较高浓度的植醇(50～100 ppm)能同时促进细胞的生长。在培养基中加入抗氧剂角鲨烯也能提高α-生育酚的积累。诱导因子寡糖对细胞的生长和α-生育酚含量均有提高作用,其中以寡糖F_(11)效果较佳。悬浮细胞培养基中同时加入15ppm的寡糖F_(11),75ppm的植醇和100 ppm的角鲨烯,细胞生长速率可提高23.81％,α-生育酚含量及产率分别比对照提高2.8倍和3.6倍。     

诱导子人参寡糖对红花培养细胞的生理效应

从人参(Panax ginseng)培养细胞中分离纯化出不同寡糖。这些寡糖能促进红花(Car-thamus tinctorius)培养细胞的生长及提高细胞中α-生育酚的含量。其中以Ⅶ、Ⅷ、Ⅵ等三种寡糖的效果较为显著。这三种寡糖的最适浓度在愈伤组织培养(5—8 mg/L)中要比在细胞悬浮培养(1—2mg/L)中高。对Ⅶ、Ⅷ两种寡糖不同时期加入的效应进行了试验,结果发现,加入寡糖后1—3天,α-生育酚的含量即提高。在红花细胞悬浮培养过程中同时加入2mg/L 的寡糖Ⅵ和寡糖Ⅶ及1mg/L 的寡糖Ⅷ,可使红花细胞生长速率提高18.11%,α-生育酚含量比对照提高3.5倍,其产率比对照提高4.3倍。     

红花细胞培养条件的优化及其胞内产物生育酚的

红花（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｏｕｓ）的子叶能诱志出愈伤组织,并且该愈伤组织能合成生育酚。正相高效液相色谱测定的结果表明,其主要成分是α－生育酚。在ＭＳ培养基基础上添加０．１％酪蛋白,并将生长调节剂浓度调整为２,４－Ｄ０．３０ｍｇ／Ｌ,６－ＢＡ １．８０ｍｇ／Ｌ,槿使α,β－γ生育酚含量分别达４．１７０６,０．３１２０,０．１６５０μｇ／ｇ鲜重。     

油菜游离细胞培养及易再生的体细胞无性系的建立

以芥菜型油菜(Brcssica juncea)下胚轴来源的愈伤组织为材料,进行悬浮细胞振荡培养,得到游离的单细胞。这些细胞作浅层液体静置培养,可获得高频率的愈伤组织。在附加有水解乳蛋白200毫克/升、BA 2—3毫克/升及GA,0.1—1毫克/升的MS培养基上,这些愈伤组织分化了芽。分化的芽在无激素或附加有0.01—0.1毫克/升IAA或NAA的MS培养基上长出根,从而发育成完整植株。当对游离细胞获得的再生植株的茎切段愈伤组织,再经上述程序进行细胞培养时,发现愈伤组织诱导率及愈伤组织分化频率均远远高于原供体,从而建立了B.juncea易再生的体细胞无性系。     

苦荞胚性愈伤组织诱导与植株再生研究

以苦荞子叶和下胚轴为外植体,进行了不同浓度激素组合的MS和SH固体培养基对胚性愈伤组织诱导及植株再生的研究。结果发现,MS培养基比SH培养基更有利于胚性愈伤组织诱导;2,4-D是诱导愈伤组织的有效激素,KT能有效促进胚状体的形成;下胚轴和子叶都能有效诱导出胚性愈伤组织和再生植株。下胚轴在MS 1.5mg·L-12,4-D 1.5mg·L-1BA培养基,子叶在MS 2mg·L-12,4-D 0.5~1.5mg·L-1BA上能高效诱导出愈伤组织;愈伤组织在MS 2mg·L-12,4-D 0.1mg·L-1KT培养基中继代,能有效诱导胚性愈伤组织;来自下胚轴的胚性愈伤组织在1/2MS 2.0mg·L-1BA 0.5mg·L-1KT 0.1mg·L-1NAA培养基上能够高频再生出芽,来自子叶的胚性愈伤组织在1/2MS 1.0mg·L-1BA 0.1mg·L-1KT 0.1mg·L-1NAA培养基上芽诱导率较高;MS 1mg·L-1NAA是适宜的再生苗生根培养基。     

在分化条件下水稻花粉愈伤组织超微结构的变化

对分别生长在含有2,4-D2毫克/升的诱导培养基上和生长在不含2,4-D 而含有激动素0.5毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升的分化培养基上的水稻花粉愈伤组织进行了透射电子显微镜的对比观察。发现当愈伤组织由诱导培养基上转移到分化培养基上之后,细胞发生了一定的超微结构上的变化。处于旺盛分裂状态有可能分化成芽原基的某些愈伤组织表层细胞中的线粒体、质体、核糖核蛋白体的数量增多了。愈伤组织内部薄壁细胞的液泡化程度变小,类脂体、淀粉粒等贮藏物质大大减少或完全消失。愈伤组织中除了有导管分子的分化外还发生了筛管分子的分化。细胞的类型增多了,出现了一些电子密度极高的细胞。虽然愈伤组织转移到分化培养基上之后所发生的上述变化是明确的,但我们认为这不一定是细胞分化的特异标志。为了进一步揭露细胞分化的实质,需要在细胞化学和分子生物学方面进行更多的工作。     

荞麦组织培养及高频植株再生体系的建立

通过对荞麦(Fagopyrum esculentum Moench)不同外植体、不同激素配比的比较研究,建立了荞麦离体培养高效植株再生体系。荞麦子叶切段在含2．0 mg/L 2,4-D和1．0 mg/L 6-BA的MS培养基上愈伤组织诱导率为89．6％,而下胚轴切段在含2．0 mg/L 2,4-D和1．0-2．0 mg/L 6-BA MS培养基上愈伤组织诱导率高达100％。在2．0 mg／L 6-BA、0．1 mg,L IAA和1 mg／L KT的MS培养基上通过愈伤组织间接分化或外植体直接分化形成不定芽。来自子叶和下胚轴的愈伤组织的分化率分别为42．5％和73．6％,下胚轴的分化率明显高于子叶。将生长状态良好的不定芽转至含1．0 mg/L IBA和0．5mg/L NAA的1/2 MS培养基上生根,生根率达到100％。再生植株移栽到盆土中,成活率达91．6％,并且生长状态和特征均表现正常。     

三七愈伤组织的培养

在MS培养基中加入不同浓度的KT和2,4-D,综合考虑三七愈伤组织生长缓慢兼顾皂甙含量,较合适的KT浓度为0.7ppm,较合适的2,4-D浓度在2—3ppm之间。在培养基中补充各种添加剂,结果以椰子乳和水解乳蛋白较好。综合生长和皂甙含量以20％的椰子乳和0.7％的水解乳蛋白较合适。从21个三七愈伤组织无性繁殖系中筛选山了5个较优的无性系,特别是其中04号无性系更优,无论生长速率还是总皂甙含量都更高。通过以上研究,使三七愈伤组织的生长速率达220毫克/升/天,是原初培养愈伤组织(54.0mg干重/升/天)的4倍。愈伤组织中总皂甙含量高达13％,是原初培养愈伤组织(5.37％)的2.4倍,为原植物的3倍。从而证明了三七培养组织次级代谢的全能性是可调节的,为三七细胞工程的工业生产应用打下了初步基础。     

芥菜型油菜原生质体再生成植株的研究

芥菜型油菜子叶和下胚轴原生质体在含0.5毫克/升NAA、0.5毫克/升2,4-D和1毫克/升BA的Nitsch培养基中发育成愈伤组织。“黄辣芥”子叶原生质体来源的愈伤组织在无生长素而含有3毫克/升BA或2毫克/升KIN的MS固体培养基上分化了芽;即使是低水平的生长素(0.05毫克/升NAA)也不利于芽的分化。当芽长到2—3厘米高时,将其从愈伤组织上切下,转移到不含细胞分裂素而有0.01—0.05毫克/升IAA的MS培养基上,很快长出根,从而得到完整的再生植株。     

培养矮牵牛叶肉原生质体的几种较好的培养基

本文对培养在8种不同培养基上的矮牵牛(Petunia hybrida)叶肉原生质体的生长情况进行了比较。在所用的培养基上,原生质体都再生了细胞壁、产生了持续的细胞分裂并发育成小细胞团。在其中6种培养基上得到了愈伤组织。最好的两种培养基是我们组合的G培养基及修改的K培养基,它们的植板效率分别达到56％及70％。 还进行了一些激素组合对愈伤组织生长和分化影响的试验,某些激素组合对愈伤组织的生长有较大的影响,在某些激素组合的培养基上愈伤组织已分化出根。     

生长调节剂对马蹄金外植体离体培养的影响

以草坪地被植物马蹄金的无菌苗子叶、叶片和下胚轴作为外植体进行离体培养,探讨了不同植物生长调节剂对其愈伤组织诱导及分化的影响.结果表明,从不同外植体在含有不同生长调节剂的诱导培养基中进行离体培养时,都可诱导出愈伤且出愈率为43.3%～100%,其中诱导培养基(MS 100 mg/L水解酪蛋白 0.5 mg/Lα-NAA 0.2 mg/L ZT)适合于三种外植体的愈伤诱导,出愈率为100%,愈伤生长旺盛.在所有愈伤分化试验中均形成了绿色芽点,其频率为25.0%～95.0%,仅从下胚轴诱导的愈伤分化获得了再生植株,且在分化培养基(MS 100mg/L水解酪蛋白 0.1 mg/Lα-NAA 3.0 mg/L 6-BA)上的最高愈伤分化频率为20.0%.     

影响四季桔器官发生的因素

对四季桔胚轴直接出芽、愈伤组织诱导及植株再生能力的研究表明：上、下胚轴在含有BA的MT培养基上,均能直接出芽,但上胚轴出芽能力明显高于下胚轴,最高出芽率为96．9％。外植体在培养基上的接种方式,对出芽也有一定影响,上胚轴切段以形态学下端垂直插入,出芽率高,且在培养前期表现尤为突出。胚轴愈伤诱导的适宜培养基为MT＋IBA0．5mg-1＋BAgmg-1。愈伤组织分化时,上、下胚轴愈伤组织所要求的BA浓度分别为4mgL-1及2mgL-1。在根的诱导中,附加的生长素种类,不仅影响生根率的高低,而且影响上部茎叶的生长,其中以加入lmgL-1IBA的效果最好,生根率达84．4％。     

5,6-二氯-吲哚乙酸对烟草愈伤组织衰老的延缓作用

5,6-二氯-吲哚乙酸对革新烟草愈伤组织生长有影响。当愈伤组织在MS_0(对照)和MS 2,4-D培养基上培养22d时,生长停滞,细胞已呈空泡状,正常的超微结构完全破坏,细胞器不复存在,愈伤组织明显褐化。但在MS 5,6-Gl_2-IAA培养基上的愈伤组织仍能正常生长,鲜重和干重下降亦明显延缓,细胞含有原生质内含物,各种细胞器的超微结构仍保持正常。此外,后者的SOD同工酶也明显不同于其它培养基上的愈伤组织,暗示5,6-Gl_2-IAA对烟草愈伤组织衰老的延缓作用可能与SOD同工酶的调节作用有关。     

沙枣细胞悬浮培养体系的建立

分别以沙枣幼嫩叶片,茎段为外植体诱导沙枣愈伤组织,选择生长旺盛的松散愈伤组织进行细胞悬浮培养,探讨了培养基种类和激素组合对其产生的影响.结果表明,最适的沙枣愈伤组织诱导培养基为NT(包括0.1 mg·L-1BA和0.1 mg·L-1TDZ);沙枣悬浮细胞在MS,NT,WPM,B5和IS培养基中均可生长,其中在NT培养基中生长状态最好,呈现生长均一的绿色疏松状态.激素组合对沙枣细胞生长影响很大,其中附加BA 0.1 mg·L-1和TDZ 0.1 mg·L-1组合的NT液体培养基可获得大量繁殖速度快、生长均匀一致的悬浮细胞,细胞增长系数达5.73.HPLC测定结果证明沙枣细胞中含有一定量的浓缩鞣质达5.2022 mg/gDW,这为利用沙枣悬浮细胞生产次生代谢产物提供了一条有效途径.     

表油菜素内酯对苦参愈伤组织生长的影响

在苦参愈伤组织生长的最佳培养基:改良MS+TDZ 1.0 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+Cys20 mg/L上分别添加表油菜素内酯(epibrassinolide,epi-BR)0、10-7、10-5,10-3、10-1 mg/L.结果表明,愈伤组织鲜重随epi-BR浓度升高而升高,呈正相关,而干重则在10-3mg/L epi-BR浓度下达到最高,之后随epi-BR浓度升高呈下降趋势.     

柑桔茎尖培养的初步研究

截取1～2毫米高的甜橙(Citrus sinensis)茎尖,培养子经消毒的基本培养基中。比较试验了几种植物生长调节物质、蔗糖的不同浓度和培养基的物理性状对愈伤组织发生的效应。分别观察了不同天数的离体茎尖愈伤组织发生情况。发现对愈伤组织形成较好的处理有:2,4-D0.1毫克/升+Kinetin 0.25毫克/升+NAA 2.5毫克/升,单独使用2,4-D为1.5毫克/升;蔗糖浓度为5％;以及液体培养基。将具有愈伤组织的离体茎尖,转移至激素类物质为BA 0.25毫克/升+NAA 0.1毫克/升的基本培养基中,则能促使茎芽及愈伤组织的进一步生长。但不容易形成根。然后再移入只含NAA 2毫克/升的的基本培养基中,才能分化出根,形成完整的小植株。我们已经获得暗柳、雪柑和柚子等三个柑桔品种的离体茎尖培养的植株,并揭示出在同一块离体茎尖愈伤组织生长出许多小植株的可能前景。茎尖嫁接植株是用全黑暗条件培养13～14天的枳壳(Ponciruo trifoliata)等实生苗作砧木,甜橙(Citrus sinensis)茎尖长为0.2～0.4毫米、并带叶原基2～3个作接穗,在无菌条件的实体显微解剖镜下,嫁接于砧木倒T字型的缺口上,能获得嫁接绿苗18.5％的成活率。嫁接植株培养在MS液体培养基,蔗糖浓度提高到7.5％,放置于800米烛光的荧光灯、每天光照16小时的条件下。嫁接植株生长到2～4片     

花烟草叶肉原生质体再生植株

用自制的纤维素酶(EA3-867)从花烟草(Nicotiana alata)叶肉细胞制备大量有活力的原生质体。在NT培养基(内含2,4-D2,KT0.25毫克/升)上观察到原生质体长大,分裂,形成愈伤组织。愈伤组织悬浮在含有2,4-D2mg/升的MS培养基上诱导出球形胚,移入MS(BA2,IAA 0.2 mg/l)培养基上出苗。小苗移植土壤中正常生长、开花、结实。     

通过PEG法转化甘蓝获得转基因植株

通过PEG法将外源基因导入甘蓝(Brassica oleracea L.)下胚轴原生质体。以潮霉素和卡那霉素进行筛选,均成功地得到了抗性愈伤组织。对于潮霉素抗性愈伤组织,其绝对和相对转化频率分别为4.1×10~(-4)和1％～3％,在分化培养基上,抗性愈伤组织能够分化出芽。诱导生根后进行移栽,生长状况良好。Southem blotting分析表明外源基因已插入到植物细胞基因组中。对影响转化的一些因素进行了探讨。