几种培养基及光照对蝴蝶兰叶片外植体褐变的影响

蝴蝶兰叶片外植体在MS纸桥培养基上培养10 d发生褐变率较低,1/2 MS次之,MS、B₅和N₆培养基外植体褐变率最高。MS培养基中铁盐加倍或微量元素缺乏造成外植体严重褐变,培养基积累很多褐色物质;减少琼脂含量,外植体褐变加重;添加柠檬酸可减轻外植体褐变;而添加活性炭、抗坏血酸或PVP对减轻外植体褐变无显著作用。光照强度增加外植体褐变严重。     

降低卷丹百合组培褐变技术研究

以卷丹百合Lilium lancifolium鳞片为外植体,采用1/2MS+0.8 mg·L~(-1) 6-BA+0.2 mg·L~(-1) NAA为基本培养基,研究不同消毒时间的外植体消毒效果,探讨聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、抗坏血酸(V?)、活性炭(AC)以及光、暗两种培养条件对卷丹百合组织培养过程中褐变的影响。结果表明,用75%酒精消毒30 s、0.1%HgCl_2消毒10 min、2%NaClO消毒6 min的消毒效果最好,污染率为33.33%,成活率和诱导率均为66.67%。在培养基中加入PVP、V?、AC和暗培养均能减轻褐变的发生,其中以4.5 mg·L~(-1) PVP处理对卷丹百合褐变的抑制效果最好,外植体褐变率最低为30%,愈伤组织诱导率为70%。     

黑莓外植体褐化影响因素分析及适宜培养条件筛选

以黑莓(Rubus spp.)品种'Kiowa'为实验对象,研究了基本培养基类型、外植体类型、枝条暗处理时间、防褐化剂以及光照度对组织培养中外植体褐化及腋芽诱导的影响.结果表明,在供试的6种基本培养基(MS、1/2 MS、B5、1/2 B5、N6和1/2 N6)中,在MS培养基上外植体的褐化率较低(37.78%)、腋芽诱导率最高(67.89%)且生长状况良好;褐化程度与外植体的木质化程度及取材部位均有一定的关系,以1年生半木质化枝条的上部茎段为外植体,褐化率最低(19.67%)、腋芽诱导率较高(91.89%)且生长状况良好;接种前进行一定时间的暗处理对外植体褐化有一定的抑制作用,对枝条暗处理3 d,防褐化效果最佳;在培养基中添加不同类型和浓度的防褐化剂对外植体褐化和腋芽诱导也有一定的影响,以添加3 000 mg·L-1活性炭或200 mg·L-1 VC的防褐化效果较好;培养过程中的光照度与外植体褐化也有一定的关系,在1 500 lx光照度下外植体的褐化率较低(15.66%)且腋芽诱导率和生长状况均较好.根据实验结果,筛选出防止黑莓外植体褐化的适宜培养条件为:以1年生半木质化枝条的上部茎段为外植体,15 ℃暗处理3 d后,消毒并接种在添加了3 000 mg·L-1活性炭或200 mg·L-1 VC的MS培养基(含20 g·L-1蔗糖、5.6 g·L-1琼脂及0.2 mg·L-1 6-BA,pH 5.8)上,置于光照度1 500 lx的条件下培养.     

芍药组织培养中污染现象的克服

针对芍药在组织培养过程中外植体污染难于控制的问题进行了研究。试验分别于不同的季节取材后对外植体进行不同的表面消毒处理。结果表明：以芍药带芽茎段、顶芽、侧芽为外植体,采用0.1%~0.2% HgCl2消毒8 min,结合母株黄化处理、4℃消毒液+搅拌的表面消毒处理,可降低外植体初期培养污染率;在培养基中添加抗菌素,可明显控制内生菌的污染。     

蒜头果组培褐化控制技术研究

采用正交试验设计,研究蒜头果Malania oleifera组织培养过程中的褐化发生和控制措施。结果表明,引起蒜头果褐化的因素主次顺序为材料类型抗氧化剂类型消毒方式培养基类型,选择半木质化的当年生新枝作为外植体是减轻褐化的关键,培养基中添加2 g·L~(-1) PVP能有效控制褐化产生。控制褐化并提高获得率的最佳方法为采用半木质化新枝为外植体,并以0.1%升汞6 min+2%次氯酸钠10 min消毒,在含2 g·L~(-1)PVP的1/2WPM培养基中培养。     

晚松不同外植体腋芽诱导的初步研究北大核心CSCD

以一年生晚松实生苗春梢不同部位的茎段和种子萌发的顶芽两种材料为外植体,用浓度为0.1%的升汞对外植体进行消毒处理,选择消毒效果较好的外植体作为无菌材料,然后优化最适合腋芽诱导的培养基类型和激素水平组合。结果表明,0.1%的升汞消毒处理10 min的春梢中部茎段最佳,污染率最低,为0.8%,其腋芽诱导的最佳培养基和激素浓度为:MS+2.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA。而种子的最佳消毒时间为4 min,污染率为2.4%,在含有0.7 mg/L NAA和1.0 mg/L 6-BA的MS培养基中诱导率最高。本文建立了由春梢茎段和种子诱导腋芽的有效方法,为晚松的快速繁育提供理论依据和技术支持。     

晚松不同外植体腋芽诱导的初步研究

以一年生晚松实生苗春梢不同部位的茎段和种子萌发的顶芽两种材料为外植体,用浓度为0.1%的升汞对外植体进行消毒处理,选择消毒效果较好的外植体作为无菌材料,然后优化最适合腋芽诱导的培养基类型和激素水平组合。结果表明,0.1%的升汞消毒处理10 min的春梢中部茎段最佳,污染率最低,为0.8%,其腋芽诱导的最佳培养基和激素浓度为:MS+2.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA。而种子的最佳消毒时间为4 min,污染率为2.4%,在含有0.7 mg/L NAA和1.0 mg/L 6-BA的MS培养基中诱导率最高。本文建立了由春梢茎段和种子诱导腋芽的有效方法,为晚松的快速繁育提供理论依据和技术支持。     

滇黄精组培褐化影响因素研究

以滇黄精Polygonatum kingianum块茎芽为外植体,对组培过程中褐化的影响因素(灭菌方式、基本培养基及培养温度)进行探讨。结果表明,先经过75%乙醇处理30s消毒表面,再用NaClO 12min+HgCl2 8min消毒的抗褐化效果最好;选用1/2MS基本培养基能有效抑制褐化;低温环境(20℃)能进一步降低褐化发生率。     

三倍体枇杷的茎尖培养及诱导生根

以三倍体枇杷为材料, 研究了不同消毒方式、MS培养基浓度、植物生长调节剂及浓度配比对茎尖培养及诱导生根的影响。结果表明, 初代培养时, 选择生长饱满、健壮的顶芽及适宜的消毒方式, 外植体剥离长度0.5-0.8 cm, 能显著提高茎尖培养的成活率; MS培养基浓度的变化对外植体的褐化没有明显的影响; 最适茎尖的启动培养基为MS＋1.0 mg·L-1 6-BA＋0.5 mg·L-1 NAA, 成活率高达84.8%; 最适组培苗生根培养基为1/2MS＋0.1 mg·L-1 NAA＋0.01 mg·L-1 IAA＋0.3%活性炭, 生根率达66.7%, 每株平均生根2.83条。该研究结果将为三倍体枇杷再生体系的建立及利用转基因技术对三倍体无籽枇杷进行遗传改良奠定基础。     

巴戟天组织培养和快速繁殖研究

以巴戟天顶芽及嫩茎节段为外植体,以MS为基本培养基,通过不同的激素种类和浓度配比,建立巴戟天组培快繁体系。结果表明,外植体表面消毒以70%酒精预处理60s,再用0.1%HgCl2浸泡10min,效果较好,茎节为外植体优于顶芽。培养基MS+BA1.0mg/L+IBA0.05mg/L利于诱导出芽,可用于初代培养;MS+BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L利于形成丛生芽,用于继代增殖,繁殖系数6.0/50d;1/2MS+IBA0.4~0.8mg/L适宜诱导生根获得再生植株,生根率100%;生根苗移栽于排水良好的火土或砂土中,成活率90%。     

多酚氧化酶抑制剂对蝴蝶兰叶外植体褐变的影响

将多酚氧化酶(PPO)抑制剂添加到酶反应液中,抗坏血酸和半胱氨酸在0.5mmol/L就完全抑制蝴蝶兰PPO活性。300mg/L柠檬酸和100~200mg/L亚硫酸氢钠分别添加到培养基中,可使蝴蝶兰外植体褐变程度降低;采用抑制剂浸泡处理外植体,对外植体褐变抑制效果最好的为50mg/L抗坏血酸,外植体在褐变发生前PPO活性低于对照。     

3种抗褐化剂影响水曲柳体胚发生的生理分析

水曲柳体胚发生过程中往往伴随褐化现象的产生,并且大多体胚生长在褐化的外植体上,为解析外植体褐化和体胚发生之间的联系,本研究通过在培养基中添加PVP（聚乙烯毗咯烷酮）、L-Glu（L-谷氨酸）和AgNO₃（硝酸银）,探究其对外植体褐化、体胚发生和生理生化的影响。研究结果表明：（1）低浓度（0.1、0.5 g·L^-1）PVP和100 mg·L^-1 L-Glu处理加剧了外植体褐化,但显著促进了体胚发生,并且体胚发生率高达60%以上（分别比对照组提高了6.59%、24.08%和22.88%）;（2）200 mg·L^-1 L-Glu处理有效降低了外植体褐化,褐化率为68.11%（相比对照组降低了5.83%）,但是体胚发生率降低,其发生率为46.32%（相较于对照组降低了22.8%）;（3）3种抗褐化剂处理后外植体细胞内的多酚氧化酶活性（PPO）和超氧化物歧化酶（SOD）活性均低于对照组,过氧化物酶（POD）活性和丙二醛（MDA）含量均高于对照组。因此,研究表明低浓度的抗褐化剂可以促进体胚发生,在这个过程中涉及到POD活性升高和MDA含量增加。本研究为解析水曲柳体胚发生伴随外植体褐化的生物学机理以及水曲柳体胚高频发生提供理论依据。     

蝴蝶兰离体培养及其相关生物技术研究进展

对蝴蝶兰(Phalaenopsis)的离体培养、褐化及控制、物理化学诱变、转基因研究进展进行了综述,包括蝴蝶兰离体培养中的外植体选择、体细胞胚胎及类原球茎诱导、培养基及培养条件、培养方式、褐化控制等关键因素,并概括了生物反应器、转基因、诱变育种等相关生物技术研究进展。成体植株的花梗、茎尖和种子以及试管苗的叶片、茎尖、根尖等均可作为外植体;影响外植体褐化的主要因素有培养基的种类、pH值、温度、外植体的生理状况等;蝴蝶兰诱变育种及转基因研究尚处于初步阶段。     

A novel technique to overcome browning in tissue culture

Experiments conducted using Dioscorea alata L. revealed that an exudate from the cut end of the explants was responsible for browning of the culture medium. Browning did not affect growth of roots and shoots when explants were cultured in a large volume of medium, but in a small volume it was lethal. Sealing the cut ends with paraffin wax was found to control browning by preventing exudation. This simple technique permitted establishment of cultures in a small volume of medium in about 90 percent of the cases, while in unsealed cultures lethal browning was recorded in 80 percent of the cases. The advantages of this technique over other methods of controlling browning are discussed.     

三尖杉外植体来源与培养基成分对愈伤组织生长的影响

为了建立和优化获得有效生物碱成分的三尖杉愈伤组织的培养技术和方法,以大连地区移栽自庐山植物园的三尖杉(Cephalotaxus)植株为原料,就外植体种类、基本培养基种类、激素种类和浓度等因素对愈伤组织诱导、生长的影响进行了系统的研究和归纳。实验发现,幼茎外植体因其出愈率早、诱导率高而最佳;培养基MS NAA3.0mg/L KT0.1mg/L为最佳诱导愈伤培养基,其诱导率达91%,继代培养基中一定浓度的NAA(1.0～3.0mg/L)有利于愈伤组织的产生,但是高浓度的NAA(8.0mg/L)则对愈伤组织的生长有抑制作用,其在MS基础培养基上较在B5和1/2MS培养基上褐化轻,生物量增长快,冬季诱导的愈伤组织,其诱导率普遍高于夏季所诱导的愈伤组织。结果表明,以11月份三尖杉幼茎为外植体,以MS NAA3.0mg/L KT0.1mg/L为诱导培养基和继代培养基,继代6～8代,每代培养30～35d,收获愈伤组织或细胞培养物,该程序是获得大量三尖杉愈伤组织的较佳培养程序。     

白及假鳞茎薄片诱导不定芽及快繁体系的构建

以白及(Bletilla striata)假鳞茎为外植体,根据上、中、下部位切取薄片,探索假鳞茎不同部位BA、NAA和TDZ对假鳞茎薄片诱导不定芽的影响,比较假鳞茎薄片不同厚度对褐化率和出芽数的影响,采用正交试验,研究了BA和NAA对不定芽增殖的效果,并对组培苗进行壮苗、生根和移栽。结果表明:假鳞茎的部位对诱导不定芽作用极显著,下部的出芽率显著高于上部和中部,BA和TDZ对诱导不定芽作用显著,NAA对诱导不定芽作用不显著。最佳诱导不定芽的方式为假鳞茎下部薄片在基本培养基+2.0 mg·L^-1BA+1.0 mg·L^-1TDZ的培养基上培养4周,出芽率为93.3%,出芽数为15个,厚度为1.6~2.0 mm的假鳞茎薄片其褐化率最低。最佳的增殖培养基为基本培养基+1.5 mg·L^-1BA+0.3 mg·L^-1NAA,增殖系数达4.3,平均苗高为7.8 cm。本研究成功建立了白及假鳞茎薄片诱导芽为关键技术的快繁技术体系,为白及种质资源创新奠定了基础。     

Increased crocin production and induction frequency of stigma-like-structure from floral organs of Crocus sativus L. by precursor feeding

The effect of different additives (sodium acetate, serine, glycine, PVP and activated charcoal) on stigma-likestructure (SLS) induction frequency and crocin production from floral organs of Crocus sativus L. was studied. Sodium acetate, a potential precursor of crocin biosynthesis, increased induction frequency of petal-originated SLS from 16.0 to 32.7%. Moreover, crocin content in SLS induced on medium supplemented with sodium acetate was increased to 6.00% from 2.21%. PVP prevented browning of explants and slightly increased induction frequency of SLS from petals. The crocin content of SLS was also increased to 5.22% by adding PVP. Although activated charcoal could efficiently reduce browning of explants, dedifferentiation of all explants was inhibited. No obvious stimulation effect had been observed with the addition of serine and glycine.     

Efficient in vitro regeneration of fireweed,a medicinal plant

Epilobium angustifolium L. (fireweed) is a medicinal plant that has been used to treat diarrhea, mucous colitis, irritable-bowel syndrome, skin problems, prostate problems, menstrual disorders, asthma, whooping cough, and hiccups. A highly efficient and rapid regeneration system via multiple shoot formation was developed for fireweed. Explants (leaf, petiole, root, and stem segments) excised from sterile seedlings were cultured on medium supplemented with different concentrations and combinations of various plant growth regulators. Explant browning, a major problem for regeneration, was overcome by adding 100 mg/l ascorbic acid to all prepared media containing growth regulator combinations. Root explants formed more shoots than other explants. Best shoot proliferation was obtained from root explants cultured on media with 0.1 mg/l BA and 0.5 mg/l IAA. Regenerated shoots were transferred to rooting media containing different concentrations of IAA, IBA, NAA or 2,4-D. Most shoots developed roots on medium with 0.5 mg/l IAA. Rooted explants were transferred to vermiculate in Magenta containers for acclimatization and after 3 weeks they were planted in to plastic pots containing potting soil and maintained in the plant growth room.     

四数九里香组织培养(简报)

以四数九里香新生带腋芽茎段为外植体,研究取材时期、6-BA浓度及生长素种类对外植体生长的影响,探讨不同浓度活性炭对外植体褐化的影响。结果表明,四数九里香组织培养适宜的取材时期为4月;外植体腋芽诱导率在6-BA浓度为2.5 mg·L^-1时表现较高;IBA是较适宜外植体生长的生长素;活性炭浓度为1.5 g·L^-1可有效减轻外植体褐化;组织培养适宜的启动培养基为MS + 6-BA 2.5 mg·L^-1 + IBA 0.1 mg·L^-1 + GA3 0.3 mg·L^-1 + 活性炭1.5 g·L^-1。