表氧化二十碳三烯对eNOS磷酸化水平的影响及其相关信号转导通路

内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)是一氧化氮(NO)参与的血管稳态调节过程中的关键酶. 多种体液因子和机械刺激都可以通过磷酸化修饰调节eNOS的活性, 但具体的信号转导通路因刺激物不同而异. 最近发现花生四烯酸细胞色素P450(CYP)表氧化酶代谢产物表氧化二十碳三烯(EETs)可以显著上调eNOS的蛋白表达并增强其活性, 但其分子机制尚不清楚. 通过在4代以内培养的牛主动脉内皮细胞中直接加入外源性EETs和转染CYP表氧化酶基因CYP2C11和CYPF87V, 并同时给予实验组不同信号转导抑制剂进行干预, 观察其对总的eNOS表达及其在Ser1179 和Thr497位点磷酸化水平的影响. 结果显示, 内外源性EETs均可以显著上调eNOS的蛋白表达并增强及其在Ser1179和Thr497位点的磷酸化水平; PI3K抑制剂LY294002可以阻断EETs对eNOS-Ser1179的磷酸化上调作用, 但它对eNOS-Thr(P)497并无影响, 而Akt抑制剂却可以抑制eNOS在这两个位点的磷酸化, 且这两种抑制剂都可以阻断EETs对eNOS的蛋白表达上调作用.结果提示: (i) EETs对eNOS的活性调节可能与PI3K/Akt所介导的eNOS-Ser1179和Akt所介导的eNOS- Thr497磷酸化水平改变相关; (ii) PI3K/Akt信号通路可能参与了EETs对eNOS的蛋白表达上调过程.     

Prosaposin对细胞增殖和凋亡的调控及其分子机制

为研究鞘脂激活蛋白原(Prosaposin)对细胞增殖、细胞凋亡的调控及其可能的分子机制, 以pcDNA3.1 in NIH3T3阴性对照细胞株和过表达prosaposin的Psap-Myc in NIH3T3细胞株为模型, 噻唑蓝(MTT)比色法检测prosaposin对细胞增殖的影响; Annexin V联合碘化丙啶(Propidium iodide, PI)法检测血清饥饿状态下prosaposin对细胞凋亡的影响; Western blotting检测PI3K/Akt信号通路中蛋白磷酸化水平的变化; Real-time PCR检测PI3K/Akt信号通路下游靶分子表达水平的改变。结果表明prosaposin可活化PI3K/Akt信号通路, 提高Akt^Ser473的磷酸化水平, 抑制细胞周期抑制基因P27^KIP1的表达, 上调细胞周期蛋白Cyclin D1的表达, 促进细胞周期从G1→S期进展; 诱导survival基因cIAP1、cIAP2的表达, 促进细胞存活。这些结果提示, prosaposin对细胞增殖和凋亡的调控可能是通过PI3K/Akt信号通路及其下游靶分子进行的。     

Myostatin通过PI3K-Akt-c-Jun信号通路调节VEGFA在MG-63细胞中的表达

类风湿关节炎患者高表达肌抑素(myostatin)和血管内皮生长因子A(VEGFA),但两者之间的关系尚不明确。该研究采用Western blot技术和RT-qPCR技术分析了myostatin刺激MG-63细胞后VEGFA蛋白和mRNA表达量的变化,采用PI3K、Akt、c-Jun的抑制剂或siRNA处理细胞后分别检测相应蛋白的磷酸化程度以及VEGFA的表达水平。结果表明,myostatin促进VEGFA蛋白和mRNA的表达,且浓度为3 ng/mL时表达量最高;myostatin处理后,PI3K、Akt、c-Jun蛋白的磷酸化程度增加,相应的抑制剂处理细胞后myostatin促进VEGFA蛋白上调的作用减弱。该研究表明,在MG-63细胞中,myostatin通过激活PI3K-Akt-c-Jun信号通路促进VEGFA的表达。     

高糖和LY294002干预影响足细胞内Ⅳ型胶原表达

探讨高糖和PI3K/Akt通路对足细胞内Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)表达的影响。体外培养小鼠足细胞,给予高糖(30mmol/L)处理后,分别于0,12,24,48h收集细胞,采用免疫细胞化学染色法和Western blot技术检测Col Ⅳ的表达;Western blot技术检测Akt的活化及LY294002对Col Ⅳ表达的抑制效应。结果表明,高糖诱导足细胞内Col Ⅳ蛋白表达增多,24h明显,各时间点与高糖刺激前相比均有统计学差异(P<0.05);高糖激活Akt蛋白磷酸化,p-Akt随刺激时间延长表达增多。PI3K/Akt通路抑制剂LY294002孵育细胞24h后,可减弱高糖诱导的足细胞内Col Ⅳ的表达(P<0.05)。因此,高糖可能通过激活PI3K/Akt通路上调足细胞内Ⅳ型胶原表达。     

BMP9对人肺腺癌A549细胞侵袭、迁移的影响及机制的研究

BMP9属于TGF-β超家族的成员,参与多种细胞的增殖、分化、凋亡、侵袭、转移过程。以人肺腺癌细胞A549作为目的细胞,采用腺病毒体外感染方式,外源性高表达BMP9。RTPCR及Western blot检测重组细胞中BMP9的表达,通过细胞划痕实验、Transwell侵袭实验检测AdBMP9细胞侵袭及迁移改变,RT-PCR及Western blot检测感染BMP9腺病毒后IL-6的mRNA和蛋白表达;Western blot检测PI3K/Akt信号通路中总Akt和磷酸化Akt蛋白的表达。结果显示:与对照组细胞相比,感染BMP9腺病毒后,A549中BMP9 mRNA和蛋白表达明显升高;实验组划痕愈合率由对照的(85.4±2.1)%与(86.5±3.4)%上升至(97.4±2.6)%(P0.05);实验组穿膜细胞数由对照的(115.5±13.1)个与(123.3±14.9)个上升至(224.3±24.6)个(P0.05);与对照组细胞相比,AdBMP9组IL-6的表达上调,磷酸化Akt蛋白表达上调。该研究表明,BMP9可能通过上调IL-6的表达,激活PI3K/Akt信号通路,促进人肺腺癌A549的侵袭、迁移。     

辛伐他汀对雷帕霉素作用下心肌微血管内皮细胞的影响

目的:研究辛伐他汀(SIM)对雷帕霉素(RAPA)引起的体外心肌微血管内皮细胞(CMECs)损害的保护机制。方法:分离、培养大鼠心肌微血管内皮细胞。经形态学及Dil-ac-LDL吞噬试验进行鉴定后,采用RAPA(100 nM)处理24小时建立CMECs损伤模型,然后加入不同浓度的SIM(0,10-2,10-1,100,101μM)培养24小时后,采用MTT,WST-8及Transwell检测受损后CMECs的增殖和迁移;采用Hoechst 33258及Caspase-3检查各组CMECs的凋亡;采用蛋白免疫印迹(Western blotting)检测Akt/p70 S6K磷酸化的程度;格里斯反应及实时逆转录PCR分别检测一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达。结果:①经形态学及Dil-ac-LDL吞噬试验均表明,成功培养CMECs;②低浓度SIM 100μM可显著改善100 nM RAPA对CMECs增殖、迁移和凋亡的影响;③SIM可通过上调PI3K/Akt进而上调p70s6K磷酸化(P0.05或P0.01);④SIM通过PI3K/Akt促进CMECs分泌NO及eNOS mRNA的表达(P0.05或P0.01)。结论:一定浓度下的SIM可改善RAPA作用下CMECs的增殖,迁移和凋亡,这些保护作用可能是通过其激活PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路实现的。     

PI3K/Akt 通路在电针预处理诱导脑缺血耐受中的机制研究

目的:通过观察电针预处理对磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)通路的变化以及该通路抑制剂对电针预处理的脑保护的影响,探讨电针预处理诱导脑缺血耐受的可能机制。方法:线栓法单侧阻断大脑中动脉120min,再灌注24h制备大鼠大脑局灶性缺血再灌注(I/R)模型;Western Blot检测Akt磷酸化水平的变化;侧脑室注射PI3K/Akt通路抑制剂LY294002;神经行为学评分(Garcia标准)及TTC染色检测脑梗死体积比评价脑损伤程度。结果:电针预处理使大鼠神经行为学评分增高,脑梗死体积比降低(P<0.05);可上调Akt磷酸化水平,I/R2h达高峰(P<0.05)。侧脑室注射PI3K/Akt抑制剂LY294002,拮抗电针预处理的脑保护作用(P<0.05)。结论:电针预处理增加Ak(tSer473)磷酸化水平,在缺血再灌注早期上调PI3K/Akt通路可能是诱导大鼠脑缺血耐受的产生的主要机制。     

体外缺血缺氧条件下大鼠骨髓间充质干细胞凋亡发生的机制研究

目的:研究体外大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)在缺血缺氧条件下发生凋亡的作用机制。方法:采取大鼠骨髓,以密度梯度离心分离出单个核细胞(MNCs),于体外培养并由牛垂体提取物(PEX)诱导扩增传代培养出骨髓间充质干细胞(MSCs)。经形态学和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定后,骨髓间充质干细胞(BMSCs)在缺血缺氧条件下培养,通过Annexin V/PI双染细胞凋亡检测比较不同组别细胞的凋亡率和蛋白印迹法(western blot)来观察细胞中蛋白的变化。结果:①经形态学观察和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定,提示骨髓间充质干细胞培养成功。②对照组(无缺血缺氧)与缺血缺氧组比较,缺血缺氧组的凋亡率显著性增加,而通过磷酸化Akt的表达量显著性增加提示PI3K(Phosphoinosi-tide-3kinase)/Akt(ProteinkinaseB,PKB)信号通路被激活(P<0.05);同时缺血缺氧组与缺血缺氧+PI3K/Akt抑制剂(LY294002)组比较,缺血缺氧+PI3K/Akt抑制剂(LY294002)组的凋亡率显著降低,而通过磷酸化Akt的表达量显著减少提示PI3K/Akt信号通路被抑制(P<0.05)。结论:PI3K/Akt信号通路对体外缺血缺氧条件下培养的骨髓间充质干细胞凋亡发生有关键性作用。     

花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶对凋亡内皮细胞Bc1-2表达、Caspase-3及MAPK活性的影响

花生四烯酸经细胞色素P450表氧化酶代谢产生的内皮来源超极化因子(EDHF)[表氧化二十烷烯酸(EETs)]对内皮细胞具有保护作用.研究了转染细胞色素P450表氧化酶基因CYPBM3·F87V、CYP2C110R及CYP2J2产生内源性EETs,通过检测内皮细胞中Bc1-2表达、caspase-3的活性及MAPK磷酸化水平探讨内源性EDHF的内皮细胞保护效应及其抗TNF-α诱导内皮细胞凋亡的作用机制.原代培养的牛主动脉血管内皮细胞转染CYP450表氧化酶基因24h后,加入TNF-α作用一定时间诱导内皮细胞凋亡,用Western印迹方法检测Bcl-2的表达,MAPK磷酸化水平,同时测定caspase-3的活性.结果显示转染表氧化酶基因能抑制TNF-α诱导的时间依赖性Bcl-2下调,抑制Caspase-3的激活.TNF-α使细胞内磷酸化MAPK水平呈时间依赖性减低,转染表氧化酶基因后细胞内的磷酸化MAPK水平较对照组升高.因此,转染表氧化酶基因CYPBM3·F87V、CYP2C11OR以及CYP2J2使内皮细胞产生内源性EETs(EDHF)通过激活MAPK(ERK1/2)途径,抑制抗凋亡基因Bcl-2的降解,抑制caspase-3的激活,从而抑制TNF-α诱导的内皮细胞凋亡,因而具有内皮保护效应.     

BMP9/PI3K/Akt信号通路抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长

探讨骨形态发生蛋白9是否可通过其它非经典BMPs/SMAD信号通路来抑制人乳腺癌癌细胞MDA-MB-231的生长。本研究采用免疫组化方法检测临床乳腺癌患者癌组织和癌旁组织中BMP9、Akt总蛋白和Akt磷酸化蛋白表达,采用Western blot检测过表达BMP9或靶向干扰BMP9后,对乳腺癌细胞中PI3K/Akt信号通路中Akt总蛋白和Akt磷酸化蛋白表达的影响,通过裸鼠异位移植瘤动物模型证实BMP9可抑制乳腺癌生长,及其对细胞增殖核抗原PCNA表达改变。结果显示,临床乳腺癌患者癌组织中BMP9表达明显低于癌旁组织,癌组织中存在BMP9表达,Akt磷酸化蛋白表达明显降低;BMP9腺病毒感染MDA-MB-231后,MDA-MB-231/BMP9组的Akt磷酸化蛋白表达明显低于MDA-MB-231/GFP,干扰掉MCF7中内源性BMP9后,MCF7/si BMP9组Akt磷酸化蛋白表达明显高于MVF7/si NC组;裸鼠移植瘤动物模型在成瘤后的第21天,MDA-MB-231/BMP9瘤体大小为(0.329±0.047)明显小于MDA-MB-231/GFP(3.102±0.027),PCNA染色显示MDA-MB-231/BMP9的PCNA阳性率为(26.3±3.1)%,明显低于MDA-MB-231/GFP(57.8±5.3)%。由此得出结论,BMP9抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长还可以通过抑制PI3K/Akt信号通路激活来发挥作用。     

PI3K/Akt在C2C12肌细胞生脂转分化中的作用

本研究的主要目的在于探明PI3K/Akt通路在肌细胞生脂转分化中的调控作用.试验培养并诱导C2C12肌细胞生脂转分化,同时使用抑制剂Wortmannin处理细胞抑制PI3K的激活,或者使用特异性siR NA转染沉默细胞内源PI3K基因的表达,观察其对肌细胞生脂转分化的影响.结果表明,随着C2C12细胞的生脂转分化,PI3K蛋白(P55亚基和P85亚基)和其下游效应分子Akt的磷酸化水平,在转分化前期提高而在转分化后期明显降低.使用Wortmannin处理细胞能够有效抑制PI3K/Akt激活,这导致C2C12细胞的生脂转分化明显受到抑制,细胞内脂肪生成量显著降低,生脂基因PPARγ、C/EBPα、FABP4和FATP1的表达水平均显著下调.使用特异性siR NA转染细胞显著下调PI3K基因表达水平和蛋白质含量,同样明显抑制了C2C12细胞的生脂转分化.此外,在转分化过程中抑制PI3K/Akt的活性和表达还激活了Caspase-3并导致细胞凋亡.综合上述结果可以确认PI3K/Akt的正常表达和激活是肌细胞生脂转分化必不可少的.     

RhoGDI2与PI3K/Akt/mTOR信号通路在肺癌细胞中的相关性研究

目的探讨肿瘤转移相关因子RhoGDI2与PI3K/Akt/mTOR信号通路在肺癌侵袭转移过程中的作用及相关机制。方法利用PI3K/Akt/mTOR信号通路上特异性的抑制剂,采用MTT法,伤口愈合实验及侵袭实验观察不同浓度药物对肺癌95D细胞生长侵袭转移能力的影响,通过Western Blot方法观察RhoGDI2蛋白水平的变化。结果PI3K抑制剂LY294002及mTOR抑制剂Rapamycin都能抑制肺癌细胞95D的侵袭转移能力,联合应用抑制作用更强。PI3K抑制剂LY294002处理组RhoGDI2蛋白的表达量增加,且随浓度增加RhoGDI2蛋白表达也增加。mTOR抑制剂Rapamycin组,在低浓度时增加RhoGDI2蛋白的表达,但增大Rapamycin的浓度,RhoGDI2蛋白的表达反而降低。低浓度LY294002组和Rapa-mycin组联合应用可以明显增加RhoGDI2蛋白的表达。结论PI3K/Akt/mTOR信号通路中Akt的活化与RhoGDI2密切相关,RhoGDI2可能直接或间接通过与Akt的相互作用参与调节肺癌的侵袭转移的过程。     

Noggin抑制乳腺癌溶骨性骨转移的作用研究

该文主要研究头蛋白(Noggin)抑制乳腺癌溶骨性骨转移的可能作用机制。通过体外慢病毒感染的方法,将Noggin慢病毒感染乳腺癌MDA-MB-231细胞, Western blot检测Noggin表达情况,利用CCK8和流式细胞术检测细胞增殖和周期改变, Western blot检测BMPs/SMAD信号通路变化和PI3K/Akt/mTOR关键分子Akt和m TOR总的蛋白和磷酸化蛋白的改变,裸鼠胫骨贴骨注射乳腺癌细胞复制骨转移动物模型,通过X片检测Noggin对乳腺癌溶骨性骨缺损的影响,免疫组化检测乳腺癌骨转移组织中Akt总的蛋白、磷酸化蛋白以及细胞核增殖抗原PCNA的改变。Noggin组的Noggin蛋白表达明显升高, Noggin慢病毒感染MDA-MB-231细胞第3天, CCK8检测其吸光度值为(0.452±0.059),显著低于RFP组(0.683±0.064),并且将细胞周期阻滞在G1期; Western blot显示Akt和mTOR总的蛋白未发生改变、磷酸化蛋白表达明显降低;乳腺癌溶骨性骨转移动物模型中Noggin组的溶骨性缺损明显低于RFP组,免疫组化结果显示PI3K/Akt/mTOR中关键分子Akt磷酸化蛋白、PCNA表达明显降低。Noggin可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路的激活来抑制乳腺癌的溶骨性骨转移。     

干扰视黄醇结合蛋白4对猪脂肪细胞PI3K/Akt信号通路的影响

视黄醇结合蛋白4(Retinol binding protein 4,RBP4)是一种脂肪细胞分泌因子,其表达水平的升高与胰岛素抵抗及Ⅱ型糖尿病等疾病密切相关,但具体作用机制尚不清楚。为明确此机制,通过包装RBP4干扰慢病毒并侵染猪前体脂肪细胞。运用胰岛素激活及诱导胰岛素抵抗模型,利用QRT-PCR及Western blotting方法检测RBP4的干扰效率及处理组PI3K/Akt信号通路相关基因的表达。结果显示RBP4的基因及蛋白的干扰效率达到60%(P<0.01)以上。进一步研究发现在胰岛素诱导及胰岛素抵抗的情况下,LH1-shRBP4干扰后可显著提高胰岛素信号通路AKT2、PI3K、GLUT4和IRS1基因mRNA的表达;明显促进AKT2、PI3K和IRS1蛋白的磷酸化;提高AKT2、PI3K和GLUT4基因的总蛋白水平。总之,RBP4干扰通过上调PI3K/Akt胰岛素信号通路相关因子的表达及其磷酸化水平,提高了胰岛素敏感性。此研究将为胰岛素抵抗相关疾病的治疗提供新思路。     

葡萄籽原花青素通过PI3K/Akt信号通路抑制氧化应激诱导的H9c2心肌细胞凋亡

为了探讨葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidin, GSP)对心肌细胞的保护作用及机制,通过CCK-8法评估细胞活力,采用Western-blot分析评估GSP对凋亡相关蛋白质(cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2)和PI3K/Akt通路相关蛋白质(p-PI3K、PI3K、p-Akt和Akt)表达水平的影响,并使用TUNEL染色和Hoechst 33258染色评估H9c2心肌细胞凋亡情况。结果显示, GSP可以抑制H₂O₂诱导的H9c2心肌细胞的细胞毒性和凋亡,使促凋亡蛋白cleaved caspase-3和Bax表达下降,并使抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平升高; GSP作用于H9c2细胞后, PI3K和Akt的磷酸化水平增加,使PI3K/Akt信号通路激活。实验结果初步表明, GSP可抑制氧化应激诱导的H9c2心肌细胞凋亡,其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

青蒿素经PI3K/Akt通路改善突触可塑性减轻糖尿病小鼠认知障碍

目的 本研究旨在阐明青蒿素对II型糖尿病（T2DM）小鼠认知功能障碍的改善作用及其机制。方法 C57BL/6J小鼠单次腹腔注射STZ（100 mg/kg）后联合高脂饲料喂养建立T2DM模型。T2DM小鼠随后腹腔注射青蒿素（40 mg/kg/d）或等体积溶剂。干预4周后，新物体识别、Y迷宫和Morris水迷宫实验检测小鼠的学习和记忆能力。蛋白质印迹法（Western blot）检测海马PI3K、Akt、磷酸化Akt、SYN和PSD-95蛋白的表达。透射电镜观察海马CA1区突触密度和突触超微结构改变。结果 与模型组相比，青蒿素干预组T2DM小鼠的认知功能显著改善，海马中PI3K和磷酸化Akt水平升高，SYN和PSD-95蛋白表达增加，CA1区神经元丢失减少。此外，青蒿素干预组小鼠CA1区的突触密度、PSD-95和突触界面曲率增加，突触间隙宽度减小。结论 青蒿素可能通过激活海马PI3K/Akt途径增强突触可塑性，从而减轻T2DM小鼠认知功能障碍；青蒿素有望成为治疗糖尿病性认知功能障碍的新型药物。     

EGCG通过PI3-K/Akt信号通路诱导人甲状腺乳头状癌细胞K1增殖和凋亡的影响

研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)通过PI3-K/Akt信号通路对人甲状腺乳头状癌细胞K1增殖和凋亡的影响。利用MTT法研究不同剂量EGCG对K1细胞的增殖作用;采用流式细胞术分析EGCG对K1细胞周期和凋亡影响;Westernblot方法检测分析EGCG对人甲状腺乳头状癌K1细胞PI3-K、Akt/p-Akt、mTOR、cyclin D1、CDK4、Bcl-2/Bad、cleaved-caspase-3蛋白表达影响。MTT结果显示EGCG作用后K1细胞增殖显著受到抑制,且表现出明显的剂量依赖性和时间依赖性(P0.001);流式细胞术结果显示EGCG能够将K1细胞阻滞于G1期,并且产生剂量依赖性诱导K1细胞凋亡(P0.001);Westernblot结果显示EGCG能够上调K1细胞促凋亡蛋白Bad及cleaved-caspase-3的表达,下调PI3-K、mTOR、cyclin D1、CDK4蛋白表达,降低AKT蛋白磷酸化及抑凋亡蛋白Bcl-2表达(P0.05)。结果证明,EGCG能够通过PI3-K/Akt信号通路,诱导G1阻滞及细胞凋亡,抑制人甲状腺乳头状癌细胞K1增殖。     

花生四烯酸细胞色素P450代谢物在肾脏生理和疾病中的作用(英文)

肾脏疾病在全球范围内都是导致死亡的重要原因。肾脏微血管功能失调在肾病的发生与发展中发挥着不可忽视的作用。药理学和生物化学等领域的许多实验方法已被用来研究花生四烯酸的细胞色素P450 (cytochrome P450, CYP450)代谢物对肾脏微血管功能的调控作用。在肾脏中,CYP450表氧化酶代谢物环氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids, EETs)主要在肾脏微血管产生。EETs可以通过舒张血管、降低血压、抗细胞凋亡、抗炎等多个方面发挥肾脏保护作用。CYP450表氧化酶代谢物EETs可作为肾脏疾病的治疗靶点。然而,在肾脏发生疾病时,肾脏微血管产生EETs的能力会显著降低。近来,用转基因动物过表达CYP450表氧化酶或用可溶性环氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase, sEH)抑制剂也均证实增加EETs水平具有明显的肾脏保护作用。本综述将重点讨论花生四烯酸的CYP450代谢物EETs在肾脏生理及疾病状态下具体的调控机制。     

血清miR-26a、miR-130a与老年急性脑梗死患者PI3K/Akt信号通路和预后的关系研究

摘要 目的：研究血清miR-26a、miR-130a与老年急性脑梗死（ACI）患者磷酸酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路和预后的关系。方法：选取2020年3月-2022年10月我院收治的98例老年ACI患者作为研究组,同期选取60例于本院体检健康的老年人作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测血清miR-26a、miR-130a表达水平,蛋白免疫印迹法检测外周血单个核细胞中PI3K、Akt蛋白表达;采用Pearson相关性分析miR-26a、miR-130a表达水平与PI3K、Akt蛋白表达的相关性。患者治疗后行1个月随访,根据改良Rankin量表（mRS）评分分为预后良好组（n=55例,mRS评分≤2分）和预后不良组（n=43例,评分＞2分）。收集患者的一般资料,采用Logistic回归模型分析老年ACI患者预后的影响因素。结果：研究组血清miR-26a表达水平高于对照组,miR-130a表达水平低于对照组（P＜0.05）。研究组PI3K蛋白表达量低于对照组,Akt蛋白表达量高于对照组（P＜0.05）。Pearson相关性分析显示,miR-26a表达水平与PI3K蛋白表达量呈负相关、与Akt蛋白表达量呈正相关,miR-130a表达水平与PI3K蛋白表达量呈正相关、与Akt蛋白表达量呈负相关（P＜0.05）。预后良好组与预后不良组在年龄、房颤占比、入院时美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分、血糖及血清miR-26a、miR-130a表达水平方面比较具有统计学意义（P＜0.05）。Logistic回归分析显示,年龄偏大、入院时NIHSS评分偏高、血糖偏高及血清miR-26a表达水平升高为老年ACI患者预后不良的危险因素,miR-130a表达水平升高为其保护因素（P＜0.05）。结论：老年ACI患者血清miR-26a表达水平升高、miR-130a表达水平下降,与PI3K/Akt信号通路密切相关,是老年ACI患者预后的影响因素。     

阿尔茨海默病血清miR-137、miR-138表达与认知功能损害和外周血淋巴细胞PI3K/Akt信号通路的关系研究

摘要 目的：探讨阿尔茨海默病（AD）患者血清微小核糖核酸（miR）-137、miR-138表达与认知功能损害和外周血淋巴细胞磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶（PI3K/Akt）信号通路的关系。方法：选取2020年1月至2022年5月青岛大学附属医院神经内科收治的95例AD患者（AD组）,根据临床痴呆评定量表（CDR）评分将患者分为轻度组（1分,35例）、中度组（2分,42例）、重度组（3分,18例）,另选取63例体检健康志愿者为对照组。检测AD组、对照组血清miR-137、miR-138表达水平以及外周血淋巴细胞PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达,采用简易智能精神状态检查量表（MMSE）、蒙特利尔认知评估量表（MoCA）评估认知功能。分析血清miR-137、miR-138与MMSE、MoCA评分以及外周血淋巴细胞PI3K、Akt、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白基因（Bax）表达的相关性。结果：AD组血清miR-137水平、外周血淋巴细胞PI3K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平及MMSE、MoCA评分低于对照组（P＜0.05）,血清miR-138、外周血淋巴细胞Bax蛋白表达水平高于对照组（P＜0.05）。重度组血清miR-137水平、外周血淋巴细胞PI3K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平及MMSE、MoCA评分低于中度组和轻度组（P＜0.05）,且中度组低于轻度组（P＜0.05）;重度组血清miR-138、外周血淋巴细胞Bax蛋白表达水平高于中度组和轻度组（P＜0.05）,且中度组高于轻度组（P＜0.05）。AD患者血清miR-137水平与MMSE、MoCA评分、外周血淋巴细胞PI3K、Akt、Bcl-2蛋白表达呈正相关（P＜0.05）,与外周血淋巴细胞Bax蛋白表达呈负相关（P＜0.05）;AD患者血清miR-138水平与MMSE、MoCA评分、外周血淋巴细胞PI3K、Akt、Bcl-2蛋白表达呈负相关（P＜0.05）,与外周血淋巴细胞Bax蛋白表达呈正相关（P＜0.05）。结论：AD患者的血清miR-137表达水平降低、miR-138表达水平增高,与认知功能障碍有关,且miR-137、miR-138可能通过调控PI3K/Akt信号通路参与AD发病过程。