消炎痛对猪胃H^＋／K^＋—ATP抑制的动力学

消炎痛作为一种要引起胃粘膜急性病变的药物,用分离提纯的猪胃Ｈ＾＋／Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓｅ证明,它可以显著的抑制此酶的活力,０．１ｍｇ／ｍＬ时即可抑制酶活力２７％,０．５ｍｇ／ｍＬ时可抑制全部活力,其Ｋ０．５为０．１８ｍｇ／ｍＬ。消炎痛对Ｈ＾＋／Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓｅ的抑制随３０℃时预保温时间的延长而加剧,１０ｍｉｎ预保温可抑制总活力的５０％。消炎痛并不影响Ｈ＾＋／Ｋ＾＋－ＴＡＰａｓｅ的转换温度以及最适     

消炎痛对猪胃H＋／K＋—ATP酶质子转运功能的抑制

作为猪胃Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的非竞争性抑制剂,消炎痛明显抑制Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ泡囊的质子转运功能,造成质子泄漏。在０．１５ｍｇ／ｍｌ蛋白深度下,４％的消炎痛结合于Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ泡囊上。它能渗入膜脂相并显著降低膜的流动性。并使Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ内源荧光受到淬灭。从实验结果看来,消炎痛对猪胃Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ质子转运功能的抑制来自对酶蛋白和膜结构影响两个方面,而非仅抑制     

K^＋对大豆下胚轴质膜H^＋—ATPase水解与质子转运活力偶联的影响

以大豆（ Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ Ｌ．） 下胚轴为材料, 采用二相法制得高纯度质膜微囊。实验发现,Ｋ＋ 对质膜Ｈ＋＿ＡＴＰａｓｅ水解活力和转运活力刺激差别显著,对转运活力刺激８５０％ , 对水解活力仅刺激２８ ．２％ 。动力学结果表明,有Ｋ＋时ＡＴＰ水解的Ｋｍ 值为０．７０ ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍａｘ 为３４４ ．８ ｎｍｏｌ Ｐｉ·ｍｇ－１ ｐｒｏｔｅｉｎ·ｍｉｎ－１ ; 无Ｋ＋ 时ＡＴＰ水解的Ｋｍ 值为１ ．１４ｍｍｏｌ／Ｌ, Ｖｍａｘ为２８５．７ ｎｍｏｌ Ｐｉ·ｍｇ－１ ｐｒｏｔｅｉｎ·ｍｉｎ－１ 。Ｋ＋ 对ＡＴＰ水解的最适ｐＨ 值也有影响,有Ｋ＋ 时为６ ．５ ,无Ｋ＋ 时降低到６．０ 。进一步实验发现,Ｋ＋ 对羟胺和钒酸钠的抑制作用影响较大,Ｋ＋ 可以提高质膜Ｈ＋＿ＡＴＰａｓｅ 对羟胺和钒酸钠的敏感性。结果表明,Ｋ＋ 可以调节大豆下胚轴质膜Ｈ＋＿ＡＴＰａｓｅ 水解与转运活力之间的偶联程度     

耐低钾水稻的根质膜ATPase和H^＋分泌特性

对耐低钾和不耐低钾的水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）“威优４９”和“远诱１号”的根原生质膜ＡＴＰａｓｅ性质的研究表明,这两种水稻的质膜ＡＴＰａｓｅ活性的最适ｐＨ均为６０,均在底物ＡＴＰ浓度为３ｍｍｏｌ／Ｌ时达到最大反应速度,Ｋｍ值均在０．８５左右。Ｋ＋对这两种水稻的质膜ＡＴＰａｓｅ活性均具有促进作用。当介质中［Ｋｍ］≤５０ｍｍｏｌ／Ｌ时随［Ｋ＋］的增大,对耐低钾品种根质膜ＡＴＰａｓｅ活性的促进作用明显大于不耐低钾品种;当介质［Ｋ＋］在１００～２００ｍｍｏｌ／Ｌ之间时,Ｋ＋对两种水稻品种质膜ＡＴＰａｓｅ活性的刺激效应的差别减小。这两个水稻品种的基础Ｈ＋分泌没有明显差别,但钾刺激的Ｈ＋分泌存在差异,Ｋ＋对耐低钾品种Ｈ＋分泌的刺激效应大于不耐低钾品种。抑制剂实验表明在耐低钾和不耐低钾的水稻品种中,Ｋ＋刺激的根质膜ＡＴＰａｓｅ活性,Ｋ＋刺激的Ｈ＋分泌和Ｋ＋吸收之间存在着紧密的联系。对Ｋ＋刺激的质膜ＡＴＰａｓｅ活性和Ｈ＋分泌的抑制会减少根对Ｋ＋的吸收量。推测耐低钾水稻的质膜ＡＴＰａｓｅ和Ｈ＋分泌对Ｋ＋更为敏感,特别是在低浓度Ｋ＋存在时,可能是耐低钾水稻更能利用低浓度Ｋ＋、在低钾环境中能更好生长的一个原因。     

三丁基锡对人红细胞膜Na~＋，K~＋－ATPase活性的抑制作用

三丁基锡（ＴＢＴ）是人红细胞膜上Ｎａ~＋,Ｋ~＋－ＡＴＰａｓｅ的一种抑制剂．该化合物对Ｎａ~＋,Ｋ~＋－ＡＴＰａｓｅ有很强的抑制能力．在正常的反应体系中,ＴＢＴ浓度仅为１０μｍｏｌ／Ｌ时,该酶的活性全部丧失;其抑制Ｎａ~＋,Ｋ~＋－ＡＴＰａｓｅ的ＩＣ＿（５０）值为２．２μｍｏｌ／Ｌ．Ｋ~＋能增强ＴＢＴ的这种抑制作用,ＴＢＴ为Ｋ~＋的反竞争性抑制剂．     

跨膜Ca~(2+)梯差对大豆下胚轴质膜H~+-ATPase活力的影响

采用两相法得到高纯度封闭的大豆下胚轴质膜微囊,研究了跨膜Ｃａ２＋梯差对质膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ质子转运和ＡＴＰ水解活力的影响。结果表明,在１０００：０．１,１０００：０．５,１０００：１及１０００：１０（μｍｏｌ／Ｌ：μｍｏｌ／Ｌ）几种梯差下,随着跨膜钙梯差的减小,质膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ质子转运活力逐步降低。然而,上述几种梯差对Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ水解活力的影响却很小。进一步研究发现,１０００：０．１及１０００：１（μｍｏｌ／Ｌ：μｍｏｌ／Ｌ）两种梯差对Ｋｍ值没有影响,但Ｋ＋对Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ的激活作用在两种梯差下存在显著差别。ＭＣ５４０荧光、ＤＰＨ荧光偏振结果表明,跨膜钙梯差影响着膜脂的聚集状态和流动性。本文对跨膜Ｃａ２＋梯差对于大豆下胚轴质膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ水解与质子转运活力影响的可能机制进行了讨论。     

乙醇能消除二环已基碳二亚胺对H^＋—ATPase复合体的抑制效应

本文发现线粒体Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ复合体先用０．５ｕｇ／ｍｌ的ＤＣＣＤ（二环已基碳二亚胺预保温处理,再经１２．５％（Ｖ／Ｖ）乙醇进一步保温处理,则乙醇可完全消除ＤＣＣＤ引起的Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ的抑制效应。若Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ用ＤＣＣＤ和乙醇同时预保温处理,则ＤＣＣＤ同样消失其抑制作用。用相同浓度的甲醇代替乙醇,则仅可部分的消除ＤＣＣＤ的抑制作用。用相同浓度的ＤＭＳＯ（二甲基亚砜）代替乙醇,则不     

豆壳过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

从豆壳抽提液经硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析,ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲合层析和Ｂｉｏ－ＧｅｌＰ－６０凝胶过滤,纯化了豆壳过氧化物酶（ｓｏｙｂｅａｎｈｕｌｐｅｒ－ｏｘｉｄａｓｅ,ＳｈＰ）．纯化酶的比活力为７０７７Ｕ／ｍｇ,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上显示出一条蛋白质带．ＳｈＰ分子量为３８０００,等电点为３．９;ＳｈＰ为一含血红素的糖蛋白,含糖量为１８．７％,光谱学分析揭示,在４０６ｎｍ处有一典型的Ｓｏｒｅｔ带,在５１０ｎｍ和６４０ｎｍ处有特征吸收峰．酶反应的最适ｐＨ在４．０附近,最适温度为４５℃;在ｐＨ２．５～１２．０之间较稳定,７５℃,保温６０ｍｉｎ,酶活力残余６８％,ＳｈＰ是一种良好的耐酸碱、耐热过氧化物酶．动力学分析求得ＳｈＰ的表观Ｋｍ（愈创木酚）为１．６２ｍｍｏｌ／Ｌ,表现Ｋｍ（Ｈ２Ｏ２）为０．３４ｍｍｏｌ／Ｌ．在所测定的化学试剂中,Ｎ－３、ＣＮ－、Ｆｅ３＋、Ｆｅ２＋和Ｓｎ２＋对酶有较强烈的抑制作用,而重金属离子Ａｇ＋、Ｈｇ２＋、Ｐｂ２＋、Ｃｕ２＋、Ｃｒ３＋以及ＳＤＳ和ＥＤＴＡ对酶活力无显著影响     

ABA、IAA和CaM对发育菜豆子叶质膜H~＋－ATPase活力的效应

以亲水性两相分配法从发育菜豆子叶制备的质膜制剂经冻融循环操作,部分膜微囊可转变成密闭的翻转型。取冻融４次的质膜微囊用于Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ试验表明,ＡＴＰａｓｅ活力为ＡＢＡ和ＣａＭ显著地激活,但受ＩＡＡ显著抑制;质子泵活力被ＡＢＡ显著促进,但为ＣａＭ显著抑制,ＩＡＡ对质子泵活力无显著效应。可以认为：ＡＢＡ促进发育菜豆子叶吸收光合同化物可能是通过促进质膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ活力,从而促进质子／蔗糖同向运输而获得;ＩＡＡ则可能对菜豆子叶的质膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ无显著效应。在激素信号传导途径中,ＣａＭ对质膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ活力可能无直接影响。     

大豆液泡膜H^＋—ATPase功能与构象关系的初步研究

大豆液泡膜Ｖ型Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ是ＡＴＰａｓｅｓ中的一种,它在植物细胞的生长发育中有重要的作用。利用竹红菌乙素（ＨＢ）和ＫＩ这两种分别猝灭蛋白质疏水区域内源荧光和亲水区域内源荧光的荧光猝灭剂,在不同ｐＨ值、温度条件下对纯化的大豆液泡膜Ｖ型ＡＴＰａｓｅ进行荧光猝灭实验,初步探讨了Ｖ型Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ的水解活性同其蛋白质折叠状态间的关系。研究表明,通过比较不同ｐＨ值、温度条件下蛋白质疏水区域和亲     

低氧、血管紧张素Ⅱ对肺内小动脉平滑肌细胞膜Ca2 ┐ATPase活力的影响

本课题观察了低氧及血管紧张素Ⅱ（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡ,ＡｎｇⅡ）对分离培养家兔肺内小动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ－Ｃｓ）膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力的影响,同时用钙通道阻断剂维拉帕米（ｖｅｒａｐａｍｉｌ,ＶＰ）进行干预,进一步了解细胞内钙与Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力的关系。结果表明：ＰＡＳＭＣｓ膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力对低氧具有短暂的耐受性,随低氧时间延长,Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力呈时间依赖性抑制;低氧、ＡＮＧⅡ均能抑制Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力（Ｐ＜０．０１）低氧＋ＡⅡ对Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力的抑制具叠加效应（Ｐ＜０．０５）;ＶＰ可逆转低氧、ＡｎｇⅡ、低氧＋ＡｎｇⅡ对Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力的抑制（Ｐ＜０．０１）。结果提示：低氧,ＡＮＧⅡ可通过抑制肺血管平滑肌细胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力而可能削弱肺血管平滑肌舒张功能也可能是低氧性肺动脉高压（ＨＰＨ）形成的原因之一。     

杜氏盐藻细胞质膜氧化还原系统与K^＋吸收

杜氏盐藻（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｓａｌｉｎａ）细胞表面存在氧化ＮＡＤＨ 与还原Ｆｅ（ＣＮ）３－６ 的氧化还原系统（ｒｅｄｏｘｓｙｓｔｅｍ ）。该系统在氧化ＮＡＤＨ 时,抑制Ｋ＋ 的吸收,在还原Ｆｅ（ＣＮ）３－６ 时, 促进Ｋ＋ 的吸收,当ＮＡＤＨ 同时存在时, 促进效应最显著, 高达７３５％ 。外源ＮＡＤＨ 促进藻细胞的氧吸收达１６５％ ,而使胞质ｐＨ 下降; 当ＮＡＤＨ 存在时, Ｆｅ（ＣＮ）３－６ 被快速地还原, 同时藻细胞膜外酸化程度增加。质膜Ｈ＋ －ＡＴＰａｓｅ和氧化还原系统的典型抑制剂都不同程度地抑制Ｋ＋ 吸收; 并且钒酸盐对Ｋ＋ 吸收的抑制可以被加入ＮＡＤＨ 和Ｆｅ（ＣＮ）３－６ 而部分恢复, 表明质膜Ｈ＋ －ＡＴＰａｓｅ和氧化还原系统共同参与了细胞Ｋ＋ 的吸收过程     

三丁基锡对人红细胞膜Na^＋,K^＋—ATPase活性的抑制作用

三丁基锡（ＴＢＴ）是人红细胞膜上Ｎａ＾＋,Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓｅ的一种抑制剂。该化合物对Ｎａ＾＋,Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓｅ有很强的抑制能力。在正常的反应体系中,ＴＢＴ浓度仅为１０μｍｏｌ／Ｌ时,该酶的活性全部丧失;其抑制Ｎａ＾＋,Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓｅ的ＩＣ５０值为２．２μｍｏｌ／Ｌ．Ｋ＾＋能增强ＴＢＴ的这种抑制作用,ＴＢＴ为Ｋ＾＋的反竞争性抑制剂。     

水分胁迫对小麦根质膜H~＋－ATPase活性与H~＋分泌的影响

在渗透势为－０．５和－１．０ＭＰａＰＥＧ处理下,不抗旱的郑引一号小麦根ＰＭＨ＋－ＡＴＰａｓｅ活性分别下降４５％和６５％,抗旱品种陕合六号则增加了１１％和１２％。小麦根组织Ｈ＋分泌与ＰＭＨ＋－ＡＴＰａｓｅ活性的变化趋势基本一致,即随着胁强增加,郑引一号Ｈ＋分泌下降,陕合六号Ｈ＋分泌是先升高后略降。Ｎａ３ＶＯ４和ＤＣＣＤ对Ｈ＋分泌有不同程度的抑制,品种之间没有明显的差异。外源电子受体Ｆｅ（ＣＮ）６３－的加入促进了小麦根Ｈ＋分泌,陕合六号增加２５％－３９％,郑引一号增加２１％－４５％。与此同时,Ｎａ３ＶＯ４没有表现出对Ｈ＋分泌的抑制作用。     

玉米根细胞中对钒酸盐敏感的H~＋－泵的研究

用奎吖咽（ｑｕｉｎａｃｒｉｎｅ）作荧光指标剂,测定玉米（ＺｅａｍａｙｓＬ．）根尖微粒体（ＭＩＣ）膜囊泡的Ｈ~＋－泵活性,结果表明１ｍｍｏｌ／ＬＮａＮ_３仅抑制该泵活性约８％,而０．８ｍｍｏｌ／Ｌ钒酸盐（Ｖａｎ）则可抑制其活性达８０％,说明ＭＩＣ制剂中Ｈ~＋－泵活性主要由质膜（ＰＭ）Ｈ~＋－ＡＴＰａｓｅ产生。此泵活性严格需要Ｍｇ~（２＋）,二价阳离子作用大小的顺序为Ｍｇ~（２＋）＞Ｍｎ~（２＋）＞Ｚｎ~（２＋）＞Ｃａ~（２＋）＝０;阴离子作用大小的１顺序为Ｂｒ~－＞Ｃｌ~－＞ＮＯ_３~－＞ＳＯ_４~（２－）,并初步证实当质膜同侧发生电子传递时,没有跨膜Ｈ~＋梯度（△μＨ~＋）生成。     

水分胁迫下钙螯合剂与CPZ抑制剂对棉花根和下胚轴两种ATPase…

水分胁迫下棉花根和下胚轴质膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ和Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ活力,表现Ｋｍ值以及Ｖｍａｘ降低。－０．３ＭＰａ和－１．１ＭＰａ胁迫下质膜ＡＴ－Ｐａｓｅ活力随时间延长分别呈“Ｖ”字形变化和下降趋势。钙螯合剂、ＣａＭ抑制剂对棉花根和下胚轴质膜ＡＴＰａｓｅ活性有明显的抑制效应,抑制程度为－１．１ＭＰａ大于－０．３ＭＰａ大于对照。     

小麦根质膜H^＋—ATPase的部分纯化

以小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）根为材料,采用不连续蔗糖密度梯度离心法制备高纯度质膜微囊。质膜经ＴｒｉｔｏｎＸ１００和ＫＣｌ处理后,再用Ｚｗｉｔｅｒｇｅｎｔ３１４增溶Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ,最后用硫酸铵沉淀得到部分纯化的质膜Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ。ＳＤＳＰＡＧＥ结果表明,经过上述步骤纯化,分子量为９４ｋＤ的膜蛋白组分得到富集;与质膜相比,其含量提高１５．７倍。部分纯化的质膜Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ可以水解ＡＴＰ,受Ｋ＋刺激,并被Ｎ,Ｎ′ｄｉｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｃａｒｂｏｄｉｍｉｄｅ（ＤＣＣＤ）抑制;ＡＴＰ水解活力被Ｎａ３ＶＯ４抑制９５％,但不被ＮａＮ３、ＮａＮＯ３和Ｎａ２ＭｏＯ４抑制。     

大豆液泡膜H~+-ATPase泵质子活性的研究

研究了大豆液泡膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ泵质子特性。液泡膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ泵质子活性受ＮＥＭ、ＮＢＤ－Ｃｌ、ＤＣＣＤ和ＮＯ３－的抑制。泵质子活性由二价阳离子启动,其有效性依次为Ｆｅ２＋＞Ｍｇ２＋＞Ｍｎ２＋,它以ＡＴＰ为最适底物,ＡＤＰ为竞争性抑制剂;最适ｐＨ为７．０,最适温度为５０°Ｃ。     

盐胁迫下无花果细胞质和液泡膜H^＋—ATPase活性对脯氨酸积累 …

盐胁迫降低无花果振荡培养细胞培养液ＰＨ添加质膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ活性抑制剂Ｎａ３ＶＯ４则抑制盐诱导的培养液ＰＨ下降,表明盐诱导培养液Ｈ下降主要是细胞质膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ活性增加的结果。ＮａＣｌ处理提高活体细胞质膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ活性,而降低膜微囊Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ活性,培养液中添加Ｎａ３ＶＯ４ ５０μｍｏｌ／Ｌ完全抑制盐胁迫下无花果细胞游离脯氨酸只累,但添加更高浓度Ｎａ３ＶＯ４,则提高     

玉米细胞质分子伴侣Hsp70的ATPase活性

玉米胚乳细胞中纯化的细胞质Ｈｓｐ７０蛋白有低水平的ＡＴＰａｓｅ 活性,它在５０ ℃、ｐＨ５ ．８ 、２０ ｍｍｏｌ／Ｌ的ＫＣｌ 条件下活性最高,Ｃａ２＋和Ｍｇ２＋ 抑制其活性。大肠杆菌ＤｎａＪ蛋白能将玉米细胞质Ｈｓｐ７０ 的ＡＴＰａｓｅ 活性提高６倍,而ＧｒｐＥ 蛋白对其影响很小。８ 种不同的人工合成多肽均能刺激该蛋白的ＡＴＰａｓｅ 活性,增加幅度从２ ．５ 倍到１０ 倍不等。亲水性不同的氨基酸对Ｈｓｐ７０ 的ＡＴＰａｓｅ 活性影响不同。玉米细胞质Ｈｓｐ７０ 是一个三磷酸核苷酸酶,除ＡＴＰ 外,它还能催化ＵＴＰ、ＧＴＰ、ＣＴＰ和ＩＴＰ的水解