| 猪霍乱沙门氏菌C500株△crp△asd缺失株平衡致死载体系统的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 徐引弟,郭爱珍,刘维红,贾爱卿,陈焕春.猪霍乱沙门氏菌C500株△crp△asd缺失株平衡致死载体系统的构建及鉴定[J].生物工程学报,2006,22(3):366-372. |
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| 作者姓名： | 徐引弟 郭爱珍 刘维红 贾爱卿 陈焕春 |
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| 作者单位： | 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,华中农业大学湖北省预防兽医学重点实验室,武汉,430070 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划) |
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| 摘 要： | 猪霍乱沙门氏菌C500株是用化学方法致弱、用于预防仔猪副伤寒的弱毒疫苗株,虽具有较好的免疫原性,但仍有一定的残余毒力。为了研制更加安全并保持C500株良好免疫原性的弱毒株,及将C500开发为适于粘膜免疫的疫苗活载体,本文构建了猪霍乱沙门氏菌C500株△crp△asd双缺失株平衡致死载体系统。首先构建含缺失320bp的crp(cAMP受体蛋白)基因与蔗糖敏感基因(sacB)的重组自杀性质粒,与C500接合转移,两步法筛选无抗性的△crp缺失株,用PCR证实基因组crp基因的缺失突变。用同样方法在crp缺失株基础上构建asd(天冬氨酸β-半乳糖脱氢酶)基因缺失株。该缺失株生长必需外源DAP(二氨基庚二酸)。进一步鉴定△crp缺失株的表型、生长特性、毒力等,结果表明△crp△asd缺失株构建成功。△crp△asd缺失株可以用来作为宿主载体平衡致死系统来高效表达外源基因,为深入研究以C500株为载体的口服多价疫苗奠定了基础。
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| 关 键 词： | 猪霍乱沙门氏菌C500株 △crp△asd缺失株 重组自杀性质粒 asd平衡致死系统 |
| 文章编号： | 1000-3061(2006)03-0366-07 |
| 收稿时间： | 12 16 2005 12:00AM |
| 修稿时间： | 03 7 2006 12:00AM |
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