miR-20a靶向CCND1作用PI3K/AKT信号通路抑制皮肤鳞状细胞癌的发展

摘要 目的：探究miR-20a与CCND1蛋白在皮肤鳞状细胞癌（CSCC）中的作用关系，以及其可能涉及的信号通路分子机制。方法：分别收集皮肤鳞状细胞癌患者的皮肤癌组织及其邻近正常皮肤组织，采用qRT-PCR分析组织中miR-20a和CCND1基因表达水平。为探究miR-20a对CSCC细胞的影响，将SCL-1细胞分为对照组（不转染）、miR-NC组（转染miR-NC）和miR-20a mimics组（转染miR-20a mimics）；为探究CCND1与PI3K/AKT信号通路的关系，将SCL-1细胞分为对照组（不转染）、si-NC组（转染si-NC）和si-CCND1组（转染si-CCND1）；为探究miR-20a与CCND1间的作用关系及对CSCC细胞的影响，将SCL-1细胞分为miR-NC组（转染miR-NC）、miR-20a mimics组（转染miR-20a mimics）、mimics+pcDNA组（共转染miR-20a mimics和pcDNA）和mimics+CCND1组（共转染miR-20a mimics和pcDNA-CCND1）。采用Western blot分析p-AKT、AKT、p-PI3K、PI3K和GSK-3β蛋白表达水平；采用MTT检测细胞增殖情况；采用流式细胞术检测细胞凋亡情况；采用Transwell分析细胞迁移和侵袭情况；采用双荧光素酶报告基因检测分析miR-20a与CCND1的靶向关系。结果：CSCC癌组织和SCL-1中miR-20a均低表达，CCND1高表达。与对照组和miR-NC组比较，miR-20a mimics组SCL-1细胞增殖水平以及侵袭和迁移数量均降低（P<0.05），SCL-1细胞凋亡水平升高（P<0.05），PI3K和AKT蛋白磷酸化水平降低（P<0.05）。TargetScanHuman数据库分析和双荧光素酶报告基因检测结果显示miR-20a与CCND1存在靶向作用关系。与对照组和si-NC组比较，si-CCND1组SCL-1细胞中CCND1和GSK-3β蛋白表达水平以及PI3K和AKT蛋白磷酸化水平均降低（P<0.01）。与miR-20a mimics组或mimics+pcDNA组比较，mimics+CCND1组SCL-1细胞增殖水平以及侵袭和迁移数量均升高（P<0.05），SCL-1细胞凋亡水平降低（P<0.05），PI3K和AKT蛋白磷酸化水平均升高（P<0.05）。结论：过表达miR-20a可能通过靶向抑制CCND1的表达而抑制PI3K/AKT信号通路的激活，从而抑制CSCC细胞的增殖、侵袭和迁移，并促进癌细胞凋亡。

miR-20a Inhibits the Development of Cutaneous Squamous Cell Carcinoma through Targeted by CCND1 in the PI3K/AKT Signaling Pathway