| 家蝇丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin15的克隆表达及重组蛋白的体外活性分析 |
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| 引用本文： | 杜敏,池骋,张涛,黄兰英,杨慧,国果,吴建伟,尚小丽.家蝇丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin15的克隆表达及重组蛋白的体外活性分析[J].环境昆虫学报,2021,43(3):699-709. |
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| 作者姓名： | 杜敏 池骋 张涛 黄兰英 杨慧 国果 吴建伟 尚小丽 |
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| 作者单位： | 贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室,贵阳550025;贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室,贵阳550025;贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心,贵阳550025 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（A2013-14）；贵州省科技合作计划（黔科合LH字[2015]7328）；贵州医科大学学术新苗培养及创新探索专项（19NSP062）；国家自然科学基金（81760647） |
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| 摘 要： | 为探明家蝇重组Serpin15蛋白的体外活性和酶稳定性,本文对家蝇Serpin15基因进行了生物信息学分析和克隆表达,并对纯化后的家蝇重组Serpin15蛋白进行了酶特性的研究.结果显示:家蝇Serpin15基因ORF框全长为1353 bp,编码450个氨基酸,理论分子量为51076.63 Da,有信号肽和一个标志抑制活性的功能结构域RCL反应环;成功构建原核表达载体pET-28a(+)-Serpin15,经诱导表达和纯化获得家蝇重组Serpin15蛋白;重组蛋白酶特性研究发现,家蝇重组Serpin15蛋白对胰蛋白酶有极显著的抑制作用,此外,将重组Serpin15蛋白经20～60℃热处理15 min,或经pH 6～10过夜处理,或经50℃和pH 8处理后室温存放15～90 min,重组蛋白的胰蛋白酶抑制活性均仍大于70％.研究结果为家蝇Serpin15蛋白的免疫功能研究奠定了重要实验基础,也为有害昆虫杀虫剂的研发提供思路.
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| 关 键 词： | 家蝇 Serpin15基因 原核表达 抑制活性 酶稳定性 |
Cloning and expression of Serpin15, a serine protease inhibitor of Musca domestica, and analysis its recombinant protein activity in vitro |
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| DU Min,CHI Cheng,ZHANG Tao,HUANG Lan-Ying,YANG Hui,GUO Guo,WU Jian-Wei,SHANG Xiao-Li.Cloning and expression of Serpin15, a serine protease inhibitor of Musca domestica, and analysis its recombinant protein activity in vitro[J].Journal of Environmental Entomology,2021,43(3):699-709. |
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| Authors: | DU Min CHI Cheng ZHANG Tao HUANG Lan-Ying YANG Hui GUO Guo WU Jian-Wei SHANG Xiao-Li |
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| Institution: | 1. The Key and Characteristic Laboratory of Modern Pathogen Biology, Basic Medical College, Guizhou Medical University, Guiyang 550025, China; 2. Immune Cells and Antibody Engineering Research Center of Guizhou Province, College of Biology and Engineering, Guizhou Medical University, Guiyang 550025, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Musca domestica Serpin15 gene prokaryotic expression in vitro activity enzyme stability |
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