| 人蛋白激酶CK2α′亚基在大肠杆菌中的克隆、表达及其重组蛋白的纯化与性质鉴定 |
| |
| 引用本文： | 陈小文,刘新光,梁景耀,梁念慈.人蛋白激酶CK2α′亚基在大肠杆菌中的克隆、表达及其重组蛋白的纯化与性质鉴定[J].中国生物化学与分子生物学报,2004,20(2):176-182. |
| |
| 作者姓名： | 陈小文 刘新光 梁景耀 梁念慈 |
| |
| 作者单位： | 1. 深圳市儿童医院儿科研究所,深圳518028
2. 广东医学院生物化学与分子生物学研究所,湛江,524023 |
| |
| 基金项目： | 广东省自然科学基金，广东省科技厅科技计划，广东省卫生厅科研项目，广东医学院校科研和教改项目 |
| |
| 摘 要： | 通过RT PCR从HL 6 0细胞获得人蛋白激酶CK2α′亚基编码区cDNA ,将NdeⅠ HindⅢ双酶切的PCR产物和pT7 7表达载体进行定向克隆、细菌转化、电泳初筛和限制性酶切分析鉴定 .随机挑选阳性克隆进行DNA测序确证 ,筛选含与已知序列完全相符的重组质粒 (命名为pTCKA′) .将其转化BL2 1(DE3)菌 ,IPTG诱导后未见高效特异表达 .然后将人CK2α′cDNA亚克隆至GST融合蛋白表达载体 ,经同样转化和诱导步骤后可见一蛋白特异高效表达 .Western印迹结果证明 :该蛋白能与兔抗人CK2α′3 3 3 3 50 肽段抗血清发生特异性免疫反应 .采用GSH Sepharose 4B柱纯化 ,凝血酶酶切 ,最后从 4g细菌获 4 4mg纯化重组蛋白 .通过性质鉴定和酶动力学分析证明 :克隆、表达和纯化的重组蛋白是有生物学活性的人CK2α′亚基 .
|
| 关 键 词： | 人蛋白激酶CK2α′亚基 克隆 pT7-7 GST融合表达 蛋白纯化 |
| 收稿时间： | 2004-04-20 |
| 修稿时间： | 2003年3月24日 |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《中国生物化学与分子生物学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《中国生物化学与分子生物学报》下载免费的PDF全文 |
|
