| L-谷氨酸氧化酶与CBD的融合表达及其在微晶纤维素上固定化分析 |
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| 引用本文： | 宋辉,张文宇,王鹏举,谭焕波,苏文成,赵树欣,邹培建.L-谷氨酸氧化酶与CBD的融合表达及其在微晶纤维素上固定化分析[J].生物工程学报,2016,32(10):1348-1361. |
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| 作者姓名： | 宋辉 张文宇 王鹏举 谭焕波 苏文成 赵树欣 邹培建 |
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| 作者单位： | 1 天津科技大学 生物工程学院，天津 300457；2 中国科学院天津工业生物技术研究所 工业酶国家工程实验室，天津 300308,2 中国科学院天津工业生物技术研究所 工业酶国家工程实验室，天津 300308,2 中国科学院天津工业生物技术研究所 工业酶国家工程实验室，天津 300308,2 中国科学院天津工业生物技术研究所 工业酶国家工程实验室，天津 300308,2 中国科学院天津工业生物技术研究所 工业酶国家工程实验室，天津 300308,1 天津科技大学 生物工程学院，天津 300457,2 中国科学院天津工业生物技术研究所 工业酶国家工程实验室，天津 300308 |
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| 基金项目： | 天津科技支撑计划项目 (No. 14ZCZDSY00057) 资助。 |
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| 摘 要： | 酶的固定化作为一种重要的技术,已在生物催化领域得到了广泛的应用。现将来源于普拉特链霉菌3304(Streptomyces platensis NTU3304)产生的胞外L-谷氨酸氧化酶(L-glutamate oxidase,Gox)基因gox融合到来源于粪碱纤维单胞菌Cellulomonas fimi的纤维素结合域(CBDcex)的基因上,构建表达载体p ETM10-Gox-CBD,并在大肠杆菌中表达。通过蛋白纯化获得融合蛋白,并命名为Gox-CBD。利用CBD对微晶纤维素特异性吸附的特性将其固定在微晶纤维素上,并对固定化酶的制备条件、结合量、酶学性质及其微晶纤维素结合稳定性等进行了研究。在4℃条件下结合约1 h,融合蛋白Gox-CBD结合在纤维素上的结合量即可达到9.0 mg/g。通过对重组型、融合表达游离的以及固定化在微晶纤维素上的谷氨酸氧化酶的酶学性质进行比较发现,固定化酶的比酶活有所降低;但固定化酶的热稳定性相对于游离酶有了很大的提高,在60℃孵育30 min后还保留有约70%的活性,而游离的重组Gox在相同条件下几乎完全失去活性。当固定化结合蛋白在p H10或者盐浓度5 mmol/L的Na Cl条件下可以牢固结合。并且可以通过一步纯化方法固定化融合蛋白Gox-CBD于微晶纤维素上。因此,L-谷氨酸氧化酶与纤维素结合域融合表达的研究为蛋白的纯化及酶的固定化提供了一种新策略。
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| 关 键 词： | L-谷氨酸氧化酶，纤维素结合域，固定化 |
| 收稿时间： | 3/1/2016 12:00:00 AM |
Analysis of immobilized L-glutamate oxidase fused with cellulose binding domain on microcrystalline cellulose |
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| Hui Song,Wenyu Zhang,Pengju Wang,Huanbo Tan,Wencheng Su,Shuxin Zhao and Peijian Zou.Analysis of immobilized L-glutamate oxidase fused with cellulose binding domain on microcrystalline cellulose[J].Chinese Journal of Biotechnology,2016,32(10):1348-1361. |
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| Authors: | Hui Song Wenyu Zhang Pengju Wang Huanbo Tan Wencheng Su Shuxin Zhao and Peijian Zou |
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| Institution: | 1 College of Bioengineering, Tianjin University of Science and Technology, Tianjin 300457, China; 2 National Engineering Laboratory for Industrial Enzymes, Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences, Tianjin 300308, China,2 National Engineering Laboratory for Industrial Enzymes, Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences, Tianjin 300308, China,2 National Engineering Laboratory for Industrial Enzymes, Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences, Tianjin 300308, China,2 National Engineering Laboratory for Industrial Enzymes, Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences, Tianjin 300308, China,2 National Engineering Laboratory for Industrial Enzymes, Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences, Tianjin 300308, China,1 College of Bioengineering, Tianjin University of Science and Technology, Tianjin 300457, China and 2 National Engineering Laboratory for Industrial Enzymes, Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences, Tianjin 300308, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | L-glutamate oxidase cellulose binding domain immobilized |
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