GST-pulldown体外研究LRP16与NF-κB/p65相互作用的功能表位 |
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引用本文: | 李小雷,伍志强,马晓星,赵亚力,韩为东.GST-pulldown体外研究LRP16与NF-κB/p65相互作用的功能表位[J].生物技术通讯,2011(5):623-626. |
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作者姓名: | 李小雷 伍志强 马晓星 赵亚力 韩为东 |
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作者单位: | 解放军总医院基础医学研究所分子生物室;解放军总医院妇产科; |
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基金项目: | 国家自然科学基金(81071617,81001184) |
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摘 要: | 目的:构建核转录因子NF-κB/p65亚基的功能表位载体,采用GST-pulldown探究p65与LRP16体外相互作用的功能表位。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-p65为模板,PCR扩增一组p65功能表位的基因片段,经测序后,克隆至pcDNA3-flag载体上,用BamHⅠ/XhoⅠ双酶切重组质粒鉴定目的片段大小,然后采用GST-pulldown实验验证LRP16与p65之间的相互作用。结果:构建了p65的5个功能表位的表达载体且可用于体外转录翻译,GST-pulldown体外研究表明,p65蛋白N端RHD结构域是与LRP16相互作用所必需的,p65的RHD结构域的缺失完全消除了p65与LRP16的体外相互作用。结论:GST-pulldown实验验证了LRP16与p65存在体外直接相互作用,并具体分析了LRP16与p65相互作用的表位。
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关 键 词: | NF-κB/p65亚基 LRP16 功能表位 相互作用 GST-pulldown RHD结构域 |
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