| 斑马鱼Fbxl5基因多克隆抗体的制备与检测 |
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| 引用本文： | 盛力翔,冯德峰,罗世锋,吴秀山,戴国,莫小阳. 斑马鱼Fbxl5基因多克隆抗体的制备与检测[J]. 激光生物学报, 2013, 22(3): 249-256 |
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| 作者姓名： | 盛力翔 冯德峰 罗世锋 吴秀山 戴国 莫小阳 |
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| 作者单位： | 湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室,心脏发育研究中心,湖南长沙410081 |
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| 基金项目： | 湖南省普通高校学科带头人培养计划，国家精品课程 |
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| 摘 要： | Fbxl5为F-box基因家族的一员,目前研究发现其与心脏的发育有关。为了在斑马鱼模型中进一步研究该基因的功能,有必要制备其多克隆抗体。通过桥式PCR扩增出亲水性和特异性均好的斑马鱼Fbxl5基因片段,将其克隆入表达载体pET-28a,转化至大肠杆菌Rosseta中。用IPTG诱导Fbxl5重组质粒得到His-Fbxl5的融合蛋白。这个融合蛋白用Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化的His-Fbxl5融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。使用Western Blot检测,获得了Fbxl5原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗Fbxl5多克隆抗体。随后检测了Fbxl5在斑马鱼胚胎和成体组织中蛋白的表达,通过基因芯片分析在Fbxl5-MO和Std胚胎样品的mRNA含量差异.所得结果显示获得了较高效价和特异性好的斑马鱼Fbxl5多克隆抗体,为Fbxl5功能的进一步研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | Fbxl5 融合蛋白 多克隆抗体 基因芯片 |
Preparation and Detection of Fbxl5 Fusion Protein and Preparation of Its Polyclonal Antibody |
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| SHENG lixiang , FENG defeng , LUO shifeng , WU Xiushan , DAI Guo , MO Xiaoyang. Preparation and Detection of Fbxl5 Fusion Protein and Preparation of Its Polyclonal Antibody[J]. ACTA Laser Biology Sinica, 2013, 22(3): 249-256 |
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| Authors: | SHENG lixiang FENG defeng LUO shifeng WU Xiushan DAI Guo MO Xiaoyang |
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| Affiliation: | * (The Center for Heart Development,Key Lab of MOE for Development Biology and Protein Chemistry, Hunan Normal University,Changsha 410081,Hunan,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Fbxl5 fusion protein polyclonal antibody gene chip |
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