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| 人表皮生长因子基因转染原代角质形成细胞 | |
| 引用本文： | 周建大,王少华,罗成群,谢慧清,刘进言,胡媛,谭建湘,李文波,陈勇.人表皮生长因子基因转染原代角质形成细胞[J].激光生物学报,2009,18(2). |
| 作者姓名： | 周建大 王少华 罗成群 谢慧清 刘进言 胡媛 谭建湘 李文波 陈勇 |
| 作者单位： | 1. 中南大学湘雅三医院整形烧伤外科,湖南,长沙,410013 2. 中南大学湘雅三医院康复医学科,湖南,长沙,410013 3. 湖南省计划生育研究所,湖南,长沙,410005 |
| 基金项目： | 湖南省自然科学基金重点项目，湖南省科学技术计划项目，湖南省卫生厅科研项目，中南大学创新基金 |
| 摘 要： | 目的:将带信号肽的人表皮生长因子基因转染原代成人角质形成细胞, 证实细胞活性及hEGF的有效表达, 为后期的皮肤修复研究打下基础.方法:先酶切验证pcDNA3.1-hEGF, 后消化成人皮肤组织, 以Defined Keratinocyte-SFM(DKSFM)传代培养角质形成细胞并鉴定, 脂质体转染质粒pcDNA3.1-hEGF入细胞, 转基因细胞培养48 h后作RT-PCR和Western-blot分析, 上清分别进行放射免疫测定和MTT测定.结果:质粒pcDNA3.1-hEGF上的hEGF序列经测序证实,双酶切后获得约230 bp和5.4 kb条带;成人角质形成细胞体外培养可快速稳定增殖, 转hEGF基因细胞经RT-PCR扩增出一条约230 bp的特异性条带, Western-blot检测到hEGF表达明显升高;放射免疫法和MTT实验证实转基因细胞有稳定的hEGF蛋白分泌.结论:质粒pcDNA3.1-hEGF在脂质体介导下成功转染成人皮肤角质形成细胞, 转基因细胞能分泌有生物活性的EGF;体外培养的成人皮肤角质形成细胞可见少量EGF分泌. |
| 关 键 词： | 皮肤 表皮生长因子 基因 角质形成细胞 质粒 |
Human Epidermal Growth Factor Gene Transfected Adult Epidermal Keratinocytes in vitro |
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| ZHOU Jian-da,WANG Shao-hua,LUO Cheng-qun,XIE Hui-qing,LIU Jin-yan,HU Yuan,TAN Jian-xiang,LI Wen-bo,CHEN Yong.Human Epidermal Growth Factor Gene Transfected Adult Epidermal Keratinocytes in vitro[J].ACTA Laser Biology Sinica,2009,18(2). | |
| Authors: | ZHOU Jian-da WANG Shao-hua LUO Cheng-qun XIE Hui-qing LIU Jin-yan HU Yuan TAN Jian-xiang LI Wen-bo CHEN Yong |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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