| 水稻cDNA文库的构建及巯基蛋白酶抑制剂cDNA的分离 |
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| 引用本文： | 周兆斓,朱祯,刘春明,张海涛,肖桂芳,李向辉.水稻cDNA文库的构建及巯基蛋白酶抑制剂cDNA的分离[J].中国科学C辑,1996,26(2):149. |
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| 作者姓名： | 周兆斓 朱祯 刘春明 张海涛 肖桂芳 李向辉 |
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| 作者单位： | 中国科学院遗传研究所 北京 100101 |
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| 摘 要： | 取开花后2周左右的水稻未成熟种子提取总RNA,分离mRNA,进而反转录合成cDNA并定向插入λgt22A克隆载体,经体外包装建成水稻未成熟种子的表达型 cDNA文库,经测定库容量达 1.5 × 106 Pfu.进一步人工合成水稻巯基蛋白酶抑制剂(Oryzacystatin)编码基因5＇-端保守的21Nt的寡核苷酸经末端标记作为探针,从 2.1×104Pfu中筛选出 9个阳性克隆,经鉴定其中 8个含有完整的水稻巯基蛋白酶抑制剂编码序列,对 1号克隆的序列分析表明,其除含有 309 bp的水稻巯基蛋白酶抑制剂编码序列外,在 5＇-端及 3＇-端还分别含有 84 bp和 497 bp的非编码序列,其中 3＇-端带有AATAAAA两个加尾信号以及31 Nt的Poly(A)尾,同水稻巯基蛋白酶抑制剂基因组序列比较,编码区碱基序列完全一致,但5＇-端和3＇-端非编码区有明显差异,其中加尾信号以后的cDNA碱基序列中含有大量的不连续插入.
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| 关 键 词： | 水稻cDNA文库 巯基蛋白酶抑制剂 抗虫基因 序列分析 |
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