| 抗人CD3单链抗体与改形单域抗体的表达 |
| |
| 引用本文： | 刘喜富,萧飒,顾征,王勇,陈艾,林晴,张卫国,黄华梁,孙健,陈润生,沈倍奋,陈兴.抗人CD3单链抗体与改形单域抗体的表达[J].中国科学C辑,1996,26(5):428. |
| |
| 作者姓名： | 刘喜富 萧飒 顾征 王勇 陈艾 林晴 张卫国 黄华梁 孙健 陈润生 沈倍奋 陈兴 |
| |
| 作者单位： | 中国科学院遗传研究所 北京 100101 2.中国科学院生物物理研究所 北京 100101 3.军事医学科学院基础研究所 北京 100850 |
| |
| 摘 要： | 设计并化学合成含有适当酶切位点及连接肽的寡核苷酸序列,与一定的背景载体连接并改造成适用于单链抗体表达的载体:外分泌型pWAI80和融合蛋白型pROH80从分泌抗人CD3单克隆抗体的杂交瘤细胞UCHT1中,经PCR扩增出轻、重链可变区基因VH和VK,并插入上述表达载体中构建成单链抗体基因.通过对鼠OKT3结合位点的结构模拟,并比较人、鼠抗体家族性保守序列,设计出改形OKT3的基因序列.化学法部分合成8个寡核苷酸片段,应用重叠PCR技术扩增出完整改形重链基因VH,并克隆、酶切和测序鉴定.将所克隆VH基因插入表达载体pCOMB3和 pGEX-4T-1中进行表达.经 IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和 Western blot分析以及 ELISA检测,结果发现分泌型表达产物及 M13基因Ⅲ-VH改形单域抗体融合蛋白具有与CD3单抗竞争抑制的活性;而融合型单链抗体及改形单域抗体表达产物主要以包涵体形式存在,占细菌总蛋白的 30％左右.
|
| 关 键 词： | 单链抗体 改形抗体 基因构建及表达 分子设计 |
|
| 点击此处可从《中国科学C辑》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《中国科学C辑》下载免费的PDF全文 |
|
