基于大肠杆菌受体菌DH5α △asd缺失株的构建及作为基因转化、表达操作系统的评估 |
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引用本文: | 原志伟,朱晓芳,朱春红,朱军,王建业,朱国强.基于大肠杆菌受体菌DH5α △asd缺失株的构建及作为基因转化、表达操作系统的评估[J].微生物学通报,2010,37(1):0048-0054. |
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作者姓名: | 原志伟 朱晓芳 朱春红 朱军 王建业 朱国强 |
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作者单位: | 1. 扬州大学兽医学院,江苏扬州,225009;中华人民共和国荣成出入境检验检疫局,山东荣成,264300 2. 扬州大学临床医学院,江苏扬州,225001 3. 扬州大学兽医学院,江苏扬州,225009 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(No. 30571374, 30771603); 江苏省属高校自然科学重大基础研究项目(No. 08KJA230002) |
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摘 要: | 基于大肠杆菌(E.coli)染色体上asd基因的已知序列,利用λ噬菌体的Red同源重组系统一步法构建E.coliDH5α的asd基因缺失突变株DH5α△asd::cat,在二次重组中利用携带能够表达FLP位点特异性重组酶的质粒pCP20介导二次同源重组,以去除上述缺失突变株中氯霉素抗性筛选基因。结合PCR扩增和测序结果,证明DH5α△asd缺失突变株的正确构建。该缺失突变株失去了在普通LB培养基上生长的能力,只有添加DAP或导入表达asd基因的质粒(asd基因互补试验)才能在LB培养基上生长,与原型DH5α比较,其生长速度和生长对数期、接受不同拷贝数质粒的转化效率几乎相一致。基于该缺失突变株构建出以asd营养基因为标志的大肠杆菌染色体-质粒平衡致死系统。体外培养连续传代50代次,pnirBMisL-fedF-asd质粒不丢失,并功能性表达F18大肠杆菌黏附素FedF。
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关 键 词: | 大肠杆菌DH5α 受体菌 Red重组系统 asd基因 突变株 |
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