| 双孢蘑菇酪氨酸酶基因在酿酒酵母中的异源表达及其酶学特性 |
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| 引用本文： | 吴玉珍,洪亚天,刘全力,徐海津,白艳玲,张秀明,乔明强. 双孢蘑菇酪氨酸酶基因在酿酒酵母中的异源表达及其酶学特性[J]. 微生物学报, 2018, 58(3): 423-431 |
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| 作者姓名： | 吴玉珍 洪亚天 刘全力 徐海津 白艳玲 张秀明 乔明强 |
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| 作者单位： | 南开大学生命科学学院, 天津 300071,南开大学生命科学学院, 天津 300071;济南市中心医院, 山东 济南 250013,南开大学生命科学学院, 天津 300071,南开大学生命科学学院, 天津 300071,南开大学生命科学学院, 天津 300071,南开大学生命科学学院, 天津 300071,南开大学生命科学学院, 天津 300071;南开大学分子微生物学与技术教育部重点实验室, 天津 300071 |
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| 基金项目： | 天津市应用基础与前沿技术重点项目（17JCZDJC32200） |
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| 摘 要： | 【目的】在酿酒酵母中异源表达双孢蘑菇来源的酪氨酸酶基因PPO2,并研究酪氨酸酶在酿酒酵母胞内及胞外的酶学特性。【方法】提取双孢蘑菇总RNA,通过RT-PCR克隆酪氨酸酶基因PPO2,构建表达载体pSP-G1-PPO2,并转化至酿酒酵母进行表达,采用镍亲和层析纯化蛋白并研究其酶学性质。【结果】在酿酒酵母中正确表达了大小为65 kDa的酪氨酸酶蛋白。重组酶能催化底物酪氨酸产生黑色素。体外活性测定表明,酪氨酸酶催化最适温度为45°C,以酪氨酸和多巴为底物时最适pH分别为7.0和8.0。在酿酒酵母中测得底物酪氨酸浓度低于2.5 mg/mL时,黑色素的产量与底物浓度呈现正相关性。【结论】来源于双孢蘑菇的酪氨酸酶基因PPO2在酿酒酵母中成功表达,重组酶具有良好的酶学特性。利用酪氨酸酶产物黑色素的产量与底物浓度呈现正相关性这一特性,可将其作为细胞酪氨酸产量的传感器,为高通量筛选酪氨酸高产菌株提供了思路。
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| 关 键 词： | 酪氨酸酶 异源表达 双孢蘑菇 酿酒酵母 酶学特性 |
| 收稿时间： | 2017-04-23 |
| 修稿时间： | 2017-06-10 |
Expression and characterization of tyrosinase from Agaricus bisporus in Saccharomyces cerevisiae |
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| Yuzhen Wu,Yatian Hong,Quanli Liu,Haijin Xu,Yanling Bai,Xiuming Zhang and Mingqiang Qiao. Expression and characterization of tyrosinase from Agaricus bisporus in Saccharomyces cerevisiae[J]. Acta microbiologica Sinica, 2018, 58(3): 423-431 |
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| Authors: | Yuzhen Wu Yatian Hong Quanli Liu Haijin Xu Yanling Bai Xiuming Zhang Mingqiang Qiao |
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| Affiliation: | College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China,College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China;Jinan Central Hospital, Jinan 250013, Shandong Province, China,College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China,College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China,College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China,College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China and College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China;Key Laboratory of Molecular Microbiology and Technology, Ministry of Education, Nankai University, Tianjin 300071, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | tyrosinase heterologous expression Agaricus bisporus Saccharomyces cerevisiae enzyme properties |
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