| ELP[I]50标签在重组硫氧还蛋白分离纯化中的应用及PEG对其相变温度的影响 |
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| 引用本文： | 葛高顺,张立超,李军明,胡学军.ELP[I]50标签在重组硫氧还蛋白分离纯化中的应用及PEG对其相变温度的影响[J].微生物学通报,2013,40(6):1074-1079. |
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| 作者姓名： | 葛高顺 张立超 李军明 胡学军 |
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| 作者单位： | 大连大学 医学院 辽宁 大连 116622 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No. 31070822); 辽宁省教育厅高校科研计划项目(No. L2010015); 大连大学博士启动基金项目 |
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| 摘 要： | 【目的】使用自行设计的类弹性蛋白(Elastin-like protein, ELP) ELPI]50作为非色谱纯化标签, 分离纯化重组硫氧还蛋白(Thioredoxin, Trx), 并研究聚乙二醇(Polyethylene glycol, PEG)对ELPI]50-Trx相变温度(Inverse temperature transition, Tt)的影响。【方法】人工合成Trx基因, 将其亚克隆到自行构建的表达载体pET28编码ELPI]50标签下游, 转入大肠杆菌BLR(DE3)进行表达。融合蛋白表达后, 采用可逆相变循环(Inverse transition cycling, ITC)分离纯化, 并检测不同浓度PEG时的Tt值。【结果】成功表达、分离纯化出融合蛋白ELPI]50-Trx, 检测出该蛋白浓度为25 μmol/L时, Tt为28.6 °C; 而当PEG的浓度为5%、10%、15%、20%时, Tt分别降至22.3 °C、15.9 °C、6 °C、0 °C。【结论】ELPI]50标签高效纯化重组蛋白具有操作简便、成本较低、易于扩大的优势, 而PEG能降低蛋白的Tt值, 进一步增强分离纯化效果, 扩大使用范围, 可望应用于分离纯化多种重组蛋白。
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| 关 键 词： | 类弹性蛋白标签 硫氧还蛋白 分离纯化 聚乙二醇 相变温度 |
The application of ELP[I]50 tag for recombinant thioredoxin purification and PEG on the influence of the inverse temperature transition |
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| GE Gao-Shun,ZHANG Li-Chao,LI Jun-Ming and HU Xue-Jun.The application of ELP[I]50 tag for recombinant thioredoxin purification and PEG on the influence of the inverse temperature transition[J].Microbiology,2013,40(6):1074-1079. |
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| Authors: | GE Gao-Shun ZHANG Li-Chao LI Jun-Ming and HU Xue-Jun |
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| Institution: | Medical College, Dalian University, Dalian, Liaoning 116622, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Elastin-like polypeptide tag Thioredoxin Purification PEG Inverse temperature transition |
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