| 短短芽孢杆菌几丁质酶BBChi4基因的原核表达及抑菌活性研究 |
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| 引用本文： | 陶小买,曾丽娜,贾化可,张婷婷,任建国,张洁,刘红美.短短芽孢杆菌几丁质酶BBChi4基因的原核表达及抑菌活性研究[J].基因组学与应用生物学,2019,38(8):3533-3539. |
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| 作者姓名： | 陶小买 曾丽娜 贾化可 张婷婷 任建国 张洁 刘红美 |
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| 作者单位： | 贵州医科大学,医药生物技术工程研究中心,贵阳,550025;贵州医科大学,生物与医学工程重点实验室,贵阳,550025;贵州医科大学,医药生物技术工程研究中心,贵阳,550025;贵州医科大学,生物与医学工程重点实验室,贵阳,550025;贵州医科大学,贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心,贵阳,550025 |
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| 基金项目： | 贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心(贵州医科大学)(黔教合KY字(2017)017);贵州医科大学生物与医学工程重点实验室;贵州医科大学医药生物技术工程研究中心;一种防治中药材根(块)茎腐烂病的微生物杀菌剂研制项目 |
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| 摘 要： | 采用生物信息学方法分析短短芽孢杆菌GZDF3菌株几丁质酶BBChi4基因,以GZDF3菌株全基因组DNA为模版设计特异性引物,通过PCR扩增出BBChi4基因的全序列并对其测序验证。将测序验证无误的基因序列连接到原核表达载体(pET-28a),构建重组表达载体pET-28a-BBchi4,转入大肠杆菌BL21进行诱导表达,利用打孔法对诱导表达产物进行抑菌活性研究。生物信息学分析显示BBChi4基因全长为2 181 bp,编码726个氨基酸,分子量大小为77.69 kD,等电点为4.83,属于酸性几丁质酶。破碎重组表达菌体上清液SDS-PAGE电泳显示,重组蛋白质分子量大约为78 kD,与生物信息学预测结果一致。诱导表达最佳参数为1 mmol/L IPTG,30℃诱导4 h。破碎重组表达菌体上清液对半夏致病真菌(尖孢镰刀菌)有较强的拮抗作用。重组表达载体pET-28a-BBchi4的成功构建及表达为深入研究几丁质酶的功能提供科学依据。
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| 关 键 词： | 短短芽孢杆菌 几丁质酶基因 原核表达 抑菌活性 |
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