| SPF鸡肝脏细胞cDNA文库的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 卢恒,谢芝勋,谢丽基,黄莉,黄娇玲,王盛,张艳芳,曾婷婷.SPF鸡肝脏细胞cDNA文库的构建及鉴定[J].基因组学与应用生物学,2019,38(6):2498-2502. |
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| 作者姓名： | 卢恒 谢芝勋 谢丽基 黄莉 黄娇玲 王盛 张艳芳 曾婷婷 |
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| 作者单位： | 广西大学动物科学技术学院,南宁,530004;广西壮族自治区兽医研究所,广西兽医生物技术重点实验室,南宁,530001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家高层次人才特殊支持计划（国家“万人计划”）;广西八桂学者专项;广西科技厅重点研发计划 |
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| 摘 要： | 旨在构建SPF鸡肝脏组织细胞的cDNA文库并且对文库质量进行鉴定。用TRIzol方法从SPF鸡肝脏组织细胞中提取总RNA,用紫外分光光度仪测定其含量后,应用SMART技术经过LD-PCR合成双链cDNA。利用CHROMA SPIN-400纯化柱纯化得到双链cDNA,并与线性pGADT7-Rec共转化进酵母Y187感受态,以同源重组的方式在酵母细胞内构建鸡肝脏酵母双杂交cDNA表达文库。结果显示,成功构建含有1.70×10~7个重组子的SPF鸡肝脏细胞cDNA文库,插入片段多数在0.4~2.0 kb之间,重组率达100%,重组子中平均插入的片段长度为1.0 kb,文库滴度为1.30×10~7 cfu/mL。结果表明,该文库达到了高质量文库所应具备的条件,为进一步筛选此文库与ARV相互作用的宿主蛋白以及研究其功能提供了数据依据。
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| 关 键 词： | 禽呼肠孤病毒 SPF鸡肝 cDNA文库 酵母双杂交 SMART技术 |
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