| 橡胶树炭疽菌蛋白激酶A催化亚基基因的克隆及表达 |
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| 作者姓名： | 赵晓宇 王记圆 廖小淼 林春花 缪卫国 刘文波 郑服丛 |
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| 作者单位： | 海南大学热带农林学院,海南大学热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室,海口,570228;海南大学热带农林学院,海南大学热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室,海口,570228;海南大学热带农林学院,海南大学热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室,海口,570228;海南大学热带农林学院,海南大学热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室,海口,570228;海南大学热带农林学院,海南大学热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室,海口,570228;海南大学热带农林学院,海南大学热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室,海口,570228;海南大学热带农林学院,海南大学热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室,海口,570228 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;国家自然科学基金;现代农业产业技术体系建设专项 |
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| 摘 要： | 为了解蛋白激酶A (protein kinase A, PKA)在橡胶树炭疽菌(Colletotrichum siamense)的生长发育和致病性中的功能。本研究利用同源克隆法设计引物,采用PCR和RT-PCR的方法获得炭疽菌(C. siamense)的PKA两个催化亚基PKA-C1与PKA-C2,并基于RSF-Duet载体构建两基因原核表达载体,在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)菌株中表达,利用SDS-PAGE检测蛋白表达情况。结果表明:催化亚基PKA-C1编码498个氨基酸,包含3个内含子;PKA-C2基因编码381个氨基酸,包含2个内含子;两基因均含有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域S_TKc和S_TK_X;聚类分析显示两基因与胶孢炭疽菌(C. gloeosporioides)依赖cAMP蛋白激酶催化亚基序列有高度同源性。SDS-PAGE检测表明目的基因在大肠杆菌中可成功表达,大小符合预期。本研究结果为进一步分析炭疽菌的PKA催化亚基基因功能提供了帮助。
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| 关 键 词： | 橡胶树 炭疽菌 蛋白激酶A 克隆 原核表达 |
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