| 偶联羟化反应和辅酶再生体系产9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮 |
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| 作者姓名： | 沙宗焱 张显 邵明龙 杨套伟 徐美娟 饶志明 |
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| 作者单位： | 江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,无锡,214122;江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,无锡,214122;江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,无锡,214122;江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,无锡,214122;江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,无锡,214122;江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,无锡,214122 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;江苏省杰出青年科学基金;中国博士后科学基金;中国博士后科学基金;中国博士后科学基金;江苏省博士后基金;中央高校基本科研业务费专项;江苏高校优势学科建设工程项目 |
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| 摘 要： | 9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮(9-OH-AD)是一种重要的甾体药物中间体,可以用来制备β-甾酮,地塞米松和其他类固醇化合物。3-甾酮9α-羟基化酶(KSH)是由两个亚基即末端氧化亚基(KshA)和铁氧还蛋白还原亚基(KshB)构成的。在本研究中,人工合成了来源于分枝杆菌Mycobacterium sp.Strain VKM Ac-1817D的kshA和kshB基因,通过优化表达载体促进了KshA和KshB在E.coli BL21(DE3)中的可溶性表达,并探究了催化体系中KSH还原亚基和氧化亚基的最适添加比例。此外,KSH转化雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)为9-OH-AD的过程中需要辅酶NADH。本研究构建了羟基化反应与利用葡萄糖脱氢酶(GDH)的NADH辅酶再生反应的偶联体系。为了进一步提高转化效率,本研究进行了转化条件的优化,并采取了分批补料的策略,最终9-OH-AD产量为4.78 g/L,转化率为96.7%。此种酶介导的转化生产9-OH-AD的方法为甾体药物生产提供了一种环境友好和经济实用型的新策略。
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| 关 键 词： | 羟化反应 辅酶再生 3-甾酮9α-羟基化酶 葡萄糖脱氢酶 |
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