| 绿色荧光蛋白标记的TGF-β1shRNA真核表达载体的构建及鉴定 |
| |
| 引用本文： | Han YL,Li N,Kang J,Qi YM,Guo L,Yan CH. 绿色荧光蛋白标记的TGF-β1shRNA真核表达载体的构建及鉴定[J]. 中国应用生理学杂志, 2009, 25(2): 244-249 |
| |
| 作者姓名： | Han YL Li N Kang J Qi YM Guo L Yan CH |
| |
| 作者单位： | 沈阳军区总医院心血管病研究所,辽宁沈阳110016 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（30370526） |
| |
| 摘 要： | 目的：构建小鼠转化生长因子β1（TGF-β1）短发夹RNA（shRNA）真核表达载体,探讨TGF-β1在血管发育中的调控作用。方法：根据GenBank小鼠TGF-β1mRNA序列,设计合成三对短链寡核苷酸,退火后形成双链DNA并克隆至入门载体DEN_mH1c。将插入目的基因片段的入门载体与带有绿色荧光蛋白（GFP）标签的shRNA真核表达载体pDS_hpEy进行LR重组反应,完成三个TGF-β1shRNA表达载体的构建,分别命名为pDS_Ta,pDS_Tb和pDS_Tc。经测序确认后,转染小鼠成纤维细胞（NIH／3T3）,筛选稳定表达的细胞克隆,以RT-PCR及Westem blot方法检测转染后TGF-β1mRNA和蛋白表达。结果：RT-PCR和Western blot显示pDS_Tc可明显下调NIH／313细胞TGF-β1的mRNA和蛋白表达,mRNA下调约为70％,蛋白表达减少约65％。结论：GFP标签TGF-β1shRNA表达载体能够阻断TGF-β1基因表达,可作为研究TGF-β1调控血管发育机制的一个工具,为阐明TGF-β1信号传导通路奠定基础。
|
| 关 键 词： | LR重组 TGF-β1shRNA 载体构建 沉默效率鉴定 |
Construction and assessment of short-hairpin RNA eukaryotic expression vector targeting TGF-beta1 labeled by GFP |
| |
| Han Ya-ling,Li Na,Kang Jian,Qi Yan-mei,Guo Liang,Yan Cheng-hui. Construction and assessment of short-hairpin RNA eukaryotic expression vector targeting TGF-beta1 labeled by GFP[J]. Chinese journal of applied physiology, 2009, 25(2): 244-249 |
| |
| Authors: | Han Ya-ling Li Na Kang Jian Qi Yan-mei Guo Liang Yan Cheng-hui |
| |
| Affiliation: | Department of Cardiology, Shenyang General Hospital, Cardiovascular Research Institute of PLA, Shenyang 110016, China. |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | LR recombination TGF-β1shRNA vectors construction assessment of silencing efficiency |
| 本文献已被 维普 PubMed 等数据库收录！ |
|
