假单胞菌M18转录调节因子σS基因与无启动子lacZ 基因融合突变株的构建和鉴定

通过菌落原位杂交和Southern 杂交，从假单胞菌M18基因组文库中克隆了rpoS基因及相邻序列。为了深入研究影响rpoS基因表达的调控因素，运用同源重组技术，将无启动子β半乳糖苷酶基因（′lacZ）插入并融合于rpoS基因中，构建了假单胞菌M18 rpoS基因突变株M18SZ。 Miller法测定显示，突变株M18SZ的β-半乳糖苷酶可高达480U，而野生株检测不到β半乳糖苷酶活性。表明，突变株中的rpoS基因与无启动子β-半乳糖苷酶基因已融合并且表达。在KMB培养基中生长量测定（OD600）的结果表明，突变株与野生株生长存在显著差异。