| 大鼠Bdnf基因慢病毒载体的构建及其在骨髓间质干细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 黄东煜,张志坚,陈柏龄,吴秀丽,王柠,张彦定.大鼠Bdnf基因慢病毒载体的构建及其在骨髓间质干细胞中的表达[J].微生物学报,2007,23(2). |
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| 作者姓名： | 黄东煜 张志坚 陈柏龄 吴秀丽 王柠 张彦定 |
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| 作者单位： | 福建医科大学附属第一医院神经内科，福州 350005;福建省神经病学研究所，福州 350005;福建医科大学附属第一医院神经内科，福州 350005;福建省神经病学研究所，福州 350005;福建医科大学神经生物学中心，福州 350004;福建医科大学附属第一医院神经内科，福州 350005;福建省神经病学研究所，福州 350005;福建省神经病学研究所，福州 350005;福建医科大学附属第一医院神经内科，福州 350005;福建省神经病学研究所，福州 350005;福建医科大学神经生物学中心，福州 350004;福建省师范大学生命科学学院，福州 350007 |
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| 基金项目： | 卫生部科学研究基金—福建省卫生教育联合攻关计划资助项目（No. WKJ2005_2_011）。 |
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| 摘 要： | 骨髓间质干细胞（MSCs）是目前基因工程正在探讨应用的靶细胞，为构建带有脑源性神经营养因子（Bdnf）基因慢病毒载体并使其在大鼠骨髓间质干细胞中表达，采用RT-PCR技术获得大鼠Bdnf基因编码区（CDS）片段，限制性内切酶酶切和基因重组构建慢病毒载体质粒PNL-BDNF-IRES2-EGFP，在脂质体介导下与包装质粒HELPER，包膜质粒VSVG共转染293T细胞包装生产慢病毒。所获慢病毒感染大鼠MSCs（rMSCs）后，PCR和免疫细胞化学法检测在rMSCs中Bdnf基因的插入和表达。结果显示所获的Bdnf基因经测序后与GenBank报道序列完全一致。重组慢病毒载体质粒PNL-BDNF-IRES2-EGFP经鉴定正确。三质粒共转染293T细胞成功，收集、浓缩病毒后测定其滴度为6.7×107TU/mL， PCR证实Bdnf基因插入病毒基因组。感染rMSCs后RT-PCR、免疫细胞化学染色及Western检测各组细胞均有BDNF蛋白表达，其中试验组BDNF-rMSCs更大量表达BDNF，与其余2组(Mock-rMSCs、rMSCs)比较差异具有统计学意义。构建带有Bdnf基因慢病毒载体并在大鼠骨髓间质干细胞中成功表达，为今后基因修饰干细胞的移植后长期观察研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 慢病毒，BDNF，骨髓间质干细胞，大鼠 |
Construction of Rat Bdnf Gene Lentiviral Vector and Its Expression in Mesenchymal Stem Cells |
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| HUANG Dong-Yu,ZHANG Zhi-Jian,CHEN Bai-Ling,WU Xiu-Li,WANG Ning and ZHANG Yan-Ding.Construction of Rat Bdnf Gene Lentiviral Vector and Its Expression in Mesenchymal Stem Cells[J].Acta Microbiologica Sinica,2007,23(2). |
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| Authors: | HUANG Dong-Yu ZHANG Zhi-Jian CHEN Bai-Ling WU Xiu-Li WANG Ning and ZHANG Yan-Ding |
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| Institution: | Fujian Research Institute of Neurology, Fuzhou 350005, China;Department of Neurology, The First Hospital Affiliated to Fujian Medical University, Fuzhou 350005, China;Fujian Research Institute of Neurology, Fuzhou 350005, China;Department of Neurology, The First Hospital Affiliated to Fujian Medical University, Fuzhou 350005, China;Center of Neuroscience, Fujian Medical University, Fuzhou;Fujian Research Institute of Neurology, Fuzhou 350005, China;Department of Neurology, The First Hospital Affiliated to Fujian Medical University, Fuzhou 350005, China;Fujian Research Institute of Neurology, Fuzhou 350005, China;Fujian Research Institute of Neurology, Fuzhou 350005, China;Department of Neurology, The First Hospital Affiliated to Fujian Medical University, Fuzhou 350005, China;Center of Neuroscience, Fujian Medical University, Fuzhou;College of Life Sciences, Fujian Normal University, Fuzhou 350007, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | lentiviral vector BDNF mesenchymal stem cells rat |
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