| 应用PCR技术快速检测熊蜂短膜虫 |
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| 引用本文： | 张体银,刘蓓,郑腾,白泉阳,田国宁,王武军,张志灯,于师宇.应用PCR技术快速检测熊蜂短膜虫[J].昆虫学报,2016(6):692-698. |
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| 作者姓名： | 张体银 刘蓓 郑腾 白泉阳 田国宁 王武军 张志灯 于师宇 |
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| 作者单位： | 1. 福建出入境检验检疫局,福建省检验检疫技术研究重点实验室,福州350001;2. 福建农林大学蜂学学院,福州,350002;3. 潍坊出入境检验检疫局,山东潍坊,261041 |
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| 基金项目： | 国家质检总局科技计划项目(2014IK244)，福建省科技计划重点项目(2014N0001) |
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| 摘 要： | 【目的】近年来,熊蜂作为温室作物的理想授粉者在国外已被广泛利用,并且获得很好的经济效益和生态效益,所以国外熊蜂经常被进口用于设施农业。熊蜂短膜虫Crithidia bombi是熊蜂的一种重要寄生虫病,一旦随进口熊蜂传入,将给国内熊蜂蜂群带来严重危害,因此迫切需要建立一种熊蜂短膜虫检测方法。【方法】基于熊蜂短膜虫基因内转录间隔区(internal transcribed space,ITS)基因序列设计了一对引物(Cri-F/R),建立了熊蜂短膜虫的PCR检测方法,并对退火温度、引物浓度和循环个数等反应条件进行了优化,同时验证了该PCR方法的灵敏性、特异性和稳定性。【结果】以熊蜂短膜虫ITS基因保守区设计特异性引物建立的熊蜂短膜虫PCR检测方法是可行的。优化的PCR反应条件为:退火温度59℃,引物浓度0.5μmol/L,扩增循环数35次。对感染熊蜂短膜虫的熊蜂总DNA的灵敏度达到13.24×10-5ng/μL,并具有良好的特异性和稳定性。将该方法应用于熊蜂短膜虫的检测,整个检测过程不超过4 h,具有良好的适用性。【结论】研究建立了熊蜂短膜虫检测方法,能用于疫情监测和进境熊蜂的检验检疫。
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| 关 键 词： | 熊蜂短膜虫 PCR技术 内转录间隔区 熊蜂 检疫 |
Rapid detection of Crithidia bombi (Kinetoplastida:Trypanosomatidae) by using PCR technique |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Crithidia bombi PCR technique internal transcribed space (ITS) bumblebees quarantine |
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