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暗黑鳃金龟气味结合蛋白HparOBP15a基因的克隆及功能分析
引用本文:房迟琴,张鑫鑫,刘丹丹,李克斌,张帅,曹雅忠,樊东,尹姣. 暗黑鳃金龟气味结合蛋白HparOBP15a基因的克隆及功能分析[J]. 昆虫学报, 2016, 0(3): 260-268. DOI: 10.16380/j.kcxb.2016.03.002
作者姓名:房迟琴  张鑫鑫  刘丹丹  李克斌  张帅  曹雅忠  樊东  尹姣
作者单位:1. 东北农业大学农学院,哈尔滨150030;中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193;2. 中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193;3. 东北农业大学农学院,哈尔滨,150030
基金项目:国家自然科学基金项目(31572007
摘    要:【目的】暗黑鳃金龟Holotrichia parallela通过气味结合蛋白(odorant binding protein,OBP)识别性信息素和植物挥发物准确而迅速地定位配偶、寄主植物。本研究通过克隆暗黑鳃金龟气味结合蛋白15a(Hpar OBP15a)基因,解析该基因的编码蛋白特征、组织表达模式及与寄主植物气味等化合物的结合特性方面的研究,为阐明暗黑鳃金龟基于嗅觉识别的寄主植物选择机理奠定理论基础。【方法】根据暗黑鳃金龟成虫触角转录组测序的结果,利用RT-PCR克隆了Hpar OBP15a基因;Real-time PCR方法分析了该基因在成虫不同部位的表达量差异;荧光竞争结合测定了Hpar OBP15a蛋白和58种候选化合物的结合特征。【结果】暗黑鳃金龟Hpar OBP15a基因全长534 bp,编码147个氨基酸,Gen Bank登录号为AK1834747。Hpar OBP15a在触角中特异表达,且在雌虫触角中表达量显著高于雄虫。在被测的58种化合物中,Hpar OBP15a与46种气味化合物具有较好的亲和性,其中与十二烷、十二醇结合能力最强,其解离常数分别为8.5和11.3μmol/L;同时,对性信息素(L-异亮氨酸甲酯和R-芳樟醇)也有一定的结合能力(解离常数分别为21.0和18.5μmol/L)。【结论】Hpar OBP15a具有广泛的气味结合谱,其中对榆树挥发物十二烷的结合能力最强,因此该蛋白可能在暗黑鳃金龟对榆树的定位过程中具有重要作用。

关 键 词:暗黑鳃金龟  气味结合蛋白  组织表达  蛋白纯化  荧光竞争结合实验

Cloning and functional analysis of an odorant-binding protein HparOBP15a gene from Holotrichia parallela (Coleoptera: Melolonthidae)
Abstract:
Keywords:Holotrichia parallela  odorant binding protein  tissue expression  protein purification  fluorescent competitive binding assay
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