含hup基因的质粒在催娩克氏杆菌中的稳定性及吸氢酶的表达

以质料pKT230为载体，亚克隆大豆根瘤菌吸氢酶结构基因（hupSL）片段，构建成嵌合质粒pKH1。将质粒分配系统基因（parDE）片段和吸氢酶结构粒pRKBH。质粒pKH1、pRKBH和载体pRK415经转化和三亲本杂交，得到DH5α/pHR11、DH5α/pRKBH、pRK415、NG1390/pHR11、NG1390/pRKBH和NG1390/pKH1(NGH982)等接合子。稳定性分析发现，质粒pKH1在催娩克氏杆菌中传80代后仍有92％以上的菌株含此质粒，说明质粒pKH1有较高的稳定性。吸氢酶活性分析表明，H2诱导接合子NGH999和NGH982吸氢酶活性高表达，同时固氮效率和固氮酶活性也高。低碳源浓度更有利于接合子吸氢酶活性的表达和固氮效率的提高。接合子NGH982具有耐铵的基因，因此其固氮酶活性的表达有部分去铵阻遏的作用。