粗毛栓菌cDNA文库的构建和漆酶基因的表达分析 |
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作者姓名: | 张希根 何川 张义正 |
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作者单位: | 四川大学生命科学学院,四川省分子生物学与生物技术重点实验室,成都 610064
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摘 要: | 粗毛栓菌(Trametes gallica)能够分泌多种胞外氧化酶并且快速降解木质纤维素.为了快速高效分离鉴定粗毛栓菌木质纤维素降解酶相关基因,用Trizol试剂提取不同培养条件下粗毛栓菌总RNA,用CreatorTM SMARTTM cDNA Library Construction Kit和Advantage®2 PCR Kit成功构建了该菌全长cDNA文库.原始文库滴度为1.5×105cfu,重组率达99%,插入片段在0.7~2.0 kb之间,平均大小约1 kb. 随机取16个重组子进行测序,全长cDNA序列完整性率为85.7%;并筛选到1个漆酶基因,编码区长1 551 bp,预测的蛋白质由517个氨基酸残基组成,分子量为55.41 kD,等电点为4.76.用半定量RT-PCR法分析了该漆酶基因在不同培养条件下的表达水平. 结果显示,高浓度的碳源,氮源,Cu2+均能诱导此基因的表达,该结果为漆酶基因的表达调控机制的深入研究奠定了基础.
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关 键 词: | 粗毛栓菌 cDNA文库 漆酶 基因表达 反转录PCR分析 |
收稿时间: | 2009-01-10 |
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