| 滇金丝猴粪便微生物来源的β-半乳糖苷酶基因的表达及酶学性质 |
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| 作者姓名： | 张文洪 杨雁霞 杨正凤 黄遵锡 李俊俊 唐湘华 杨云娟 吴倩 慕跃林 韩楠玉 许波 |
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| 作者单位： | 云南师范大学 生命科学学院, 云南 昆明 650500,云南师范大学 生命科学学院, 云南 昆明 650500,云南师范大学 生命科学学院, 云南 昆明 650500,云南师范大学 生命科学学院, 云南 昆明 650500;生物能源持续开发利用教育部工程研究中心, 云南 昆明 650500;云南省生物质能与环境生物技术重点实验室, 云南 昆明 650500,云南师范大学 生命科学学院, 云南 昆明 650500;生物能源持续开发利用教育部工程研究中心, 云南 昆明 650500;云南省生物质能与环境生物技术重点实验室, 云南 昆明 650500,云南师范大学 生命科学学院, 云南 昆明 650500;生物能源持续开发利用教育部工程研究中心, 云南 昆明 650500;云南省生物质能与环境生物技术重点实验室, 云南 昆明 650500,云南师范大学 生命科学学院, 云南 昆明 650500;生物能源持续开发利用教育部工程研究中心, 云南 昆明 650500;云南省生物质能与环境生物技术重点实验室, 云南 昆明 650500,云南师范大学 生命科学学院, 云南 昆明 650500;生物能源持续开发利用教育部工程研究中心, 云南 昆明 650500;云南省生物质能与环境生物技术重点实验室, 云南 昆明 650500,云南师范大学 生命科学学院, 云南 昆明 650500;生物能源持续开发利用教育部工程研究中心, 云南 昆明 650500;云南省生物质能与环境生物技术重点实验室, 云南 昆明 650500,云南师范大学 生命科学学院, 云南 昆明 650500;生物能源持续开发利用教育部工程研究中心, 云南 昆明 650500;云南省生物质能与环境生物技术重点实验室, 云南 昆明 650500,云南师范大学 生命科学学院, 云南 昆明 650500;生物能源持续开发利用教育部工程研究中心, 云南 昆明 650500;云南省生物质能与环境生物技术重点实验室, 云南 昆明 650500 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31860299，31560305）；国家重点研发计划2017年度项目（2017YFB0308400）；国家重点项目（2017YFB0308401） |
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| 摘 要： | 【目的】对滇金丝猴粪便微生物来源的β-半乳糖苷酶进行异源表达和纯化,并研究其酶学性质。【方法】从滇金丝猴粪便微生物的宏基因组中克隆出一个β-半乳糖苷酶基因galRBM20_1,对该基因进行异源表达和酶学性质分析。构建含有T7强启动子的pEASY-E2-galRBM20_1质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行酶学性质研究。【结果】滇金丝猴粪便来源的β-半乳糖苷酶(galRBM20_1)最适pH为5.0,在pH 4–7之间能保留70%及其以上的活性。最适温度为45°C,在37°C和45°C下耐受1 h,酶活不变。特别的是,该酶具有良好的Na Cl稳定性,经1–5 mol/L的Na Cl作用1 h后,相对酶活均能超过初始酶活:当NaCl的作用浓度为4 mol/L时,β-半乳糖苷酶相对酶活最高(146%);当NaCl的作用浓度为5mol/L时,β-半乳糖苷酶的相对酶活仍达到135%。【结论】本研究从滇金丝猴粪便微生物的宏基因库中克隆得到β-半乳糖苷酶基因galRBM20_1,并成功在大肠杆菌BL21(DE3)表达,首次从动物胃肠道宏基因组中获得具有耐盐和转糖基产Galactooligosaccharides(GOS)性能的β-半乳糖苷酶。该酶具有良好的耐盐性,和较广的pH作用范围,使其在食品、生物技术领域和环保方面的发展具有良好的应用价值。
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| 关 键 词： | 滇金丝猴 粪便微生物宏基因组 β-半乳糖苷酶 耐盐性 转糖基 |
| 收稿时间： | 2018-10-19 |
| 修稿时间： | 2019-01-24 |
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