| 中国香菇种质资源中主要真菌病毒的多重RT-PCR检测技术 |
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| 引用本文： | 孙艺嘉,郭孟配,王锦杰,边银丙,徐章逸.中国香菇种质资源中主要真菌病毒的多重RT-PCR检测技术[J].微生物学通报,2019,46(6):1381-1389. |
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| 作者姓名： | 孙艺嘉 郭孟配 王锦杰 边银丙 徐章逸 |
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| 作者单位： | 1 华中农业大学应用真菌研究所 湖北 武汉 430070,1 华中农业大学应用真菌研究所 湖北 武汉 430070,1 华中农业大学应用真菌研究所 湖北 武汉 430070,1 华中农业大学应用真菌研究所 湖北 武汉 430070;2 湖北省食用菌工程技术研究中心 湖北 武汉 430070,1 华中农业大学应用真菌研究所 湖北 武汉 430070;2 湖北省食用菌工程技术研究中心 湖北 武汉 430070 |
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| 基金项目： | 国家现代农业产业技术体系“食用菌病害无害化轻简化防控”岗位科学家专项(CARS-20)；农业部华中作物有害生物综合治理重点实验室/农作物重大病虫草害防控湖北省重点实验室开放基金(2015ZTSJJ11) |
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| 摘 要： | 【背景】病毒是食用菌生产上较重要的一类潜在隐患。我们在前期的研究中发现,中国香菇(Lentinula edodes)种质资源中最常见的病毒有2种,分别为L. edodes partitivirus 1 (LePV1)和L. edodes mycovirus HKB (LeV-HKB)病毒,这2种病毒能单一或复合感染香菇。【目的】建立香菇种质主要病毒的快速检测技术,提高香菇病毒检测效率,降低检测成本。【方法】依据香菇β-actin基因及病毒LePV1和LeV-HKB编码依赖RNA的RNA复制酶(RdRp)基因序列分别设计引物,以复合感染了这2种香菇病毒的菌丝体为材料,对影响RT-PCR反应的主要因素模板浓度、引物浓度、dNTPs浓度、退火温度和循环次数等进行优化筛选,建立同时检测LeV-HKB病毒(LeV-HKB相关病毒)和LePV1病毒的多重RT-PCR检测技术。【结果】模板浓度、退火温度和循环次数对多重RT-PCR检测结果均有较大影响,而引物浓度和dNTPs浓度对检测结果的影响较小。所建立的多重RT-PCR技术在香菇核心种质病毒检测中表现为扩增目标条带清晰分明,检测结果与单重RT-PCR检测结果一致。对两种病毒的多重RT-PCR产物进行了序列测序,结果表明扩增片段序列与目标基因序列相似性在99%以上。【结论】所建立的多重RT-PCR检测体系具有较好的特异性与适用性,为室内和田间香菇病毒早期检测、病害流行的监测提供了技术储备。
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| 关 键 词： | 香菇，食用菌，真菌病毒，检测 |
Development of multiplex RT-PCR for the detection of two main mycoviruses infecting Chinese Lentinula edodes germplasm resource |
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| SUN Yi-Ji,GUO Meng-Pei,WANG Jin-Jie,BIAN Yin-Bing and XU Zhang-Yi.Development of multiplex RT-PCR for the detection of two main mycoviruses infecting Chinese Lentinula edodes germplasm resource[J].Microbiology,2019,46(6):1381-1389. |
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| Authors: | SUN Yi-Ji GUO Meng-Pei WANG Jin-Jie BIAN Yin-Bing and XU Zhang-Yi |
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| Affiliation: | 1 Institute of Applied Mycology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, Hubei 430070, China,1 Institute of Applied Mycology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, Hubei 430070, China,1 Institute of Applied Mycology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, Hubei 430070, China,1 Institute of Applied Mycology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, Hubei 430070, China ;2 Hubei Engineering Research Center for Edible Mushroom, Wuhan, Hubei 430070, China and 1 Institute of Applied Mycology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, Hubei 430070, China ;2 Hubei Engineering Research Center for Edible Mushroom, Wuhan, Hubei 430070, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Lentinula edodes edible fungi mycovirus detection |
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