中国水仙LAR基因启动子的克隆及功能初步分析

为了解NtLAR基因的表达调控机制，该研究以中国水仙(Narcissus tazetta var. chinensis)‘金盏银台’ DNA为模版，采用染色体步移法克隆了NtLAR基因起始密码子ATG上游启动子片段序列，测序结果显示，该克隆片段共995 bp(GenBank登录号：MH371155)。通过PlantCare数据库对获得的启动子序列顺式作用元件预测发现，NtLAR启动子序列中包含有大量顺式作用元件，如光反应元件ACE、G box、GATA motif、GT1 motif，激素响应元件CGTCA motif、ABRE、TGACG motif、TGA element，胁迫响应元件和MYB 结合位点 MBS等。成功构建了植物表达载体pBI121 pNtLAR∷GUS和pGreenII 0800 pNtLAR Luc。pBI121 pNtLAR∷GUS在烟草叶片的瞬时表达结果显示，克隆的启动子片段具有活性；pBI121 pNtLAR∷GUS在水仙不同组织器官的瞬时表达实验发现，NtLAR基因的表达具有组织特异型，其在鳞茎盘的表达量较高，在花瓣和副冠中的表达量较低；将pBI121 pNtLAR∷GUS分别和中国水仙R2R3 MYB转录因子NtMYB2、NtMYB5混合注射烟草叶片，GUS染色结果显示NtMYB2和NtMYB5并不能抑制NtLAR启动子的活性，定量PCR结果与GUS染色结果一致。采用pGreenII 0800 pNtLAR Luc载体进行双荧光素酶实验进一步验证了GUS染色实验和定量PCR结果。

Cloning and Functional Analysis of the Promoter of LAR Gene in Chinese Narcissus