| pSim6质粒与新型反选择kil系统联用在重组工程的应用 |
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| 引用本文： | 李玉娟,陈如意,杨缅峰,陈伟.pSim6质粒与新型反选择kil系统联用在重组工程的应用[J].生物工程学报,2019,35(9):1761-1770. |
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| 作者姓名： | 李玉娟 陈如意 杨缅峰 陈伟 |
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| 作者单位： | 广东药科大学 生命科学与生物制药学院 广东省生物技术候选药物研究重点实验室，广东 广州 510006,广东药科大学 生命科学与生物制药学院 广东省生物技术候选药物研究重点实验室，广东 广州 510006,广东药科大学 生命科学与生物制药学院 广东省生物技术候选药物研究重点实验室，广东 广州 510006,广东药科大学 生命科学与生物制药学院 广东省生物技术候选药物研究重点实验室，广东 广州 510006 |
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| 基金项目： | 广东省科技计划项目 (No. 2015A01017014) 资助，国家自然科学基金 (No. 31501895)。 |
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| 摘 要： | 基因工程中,无痕修饰是一种很受欢迎的基因组操作技术。反选择系统的严谨性决定了无痕修饰的效率。近期有文献报道了一种新型的反选择系统kil,该系统与质粒pSim6联用后反选择严谨性较pKD46质粒更高,预示着kil与pSim6质粒联用可以更高效地选择出重组子。据此,对大肠杆菌菌株W3110、MG1655和DH10B中的4个不同的非必需基因位点(lacI、dbpa、ack和glk)进行了分析,将不同长度的外源基因片段对预先插入这些位点的tet/kil进行基因替换。结果表明kil与pSim6质粒联用较其与pKD46质粒联用,重组效率均有显著提高,并且随着外源片段的增长,效果更明显。外源片段为1 000 bp时,kil与pSim6质粒联用是其与pKD46联用的1.2–2倍;外源片段为2 000 bp时,则是pKD46的2.2–5倍。综上,kil与pSim6联用具有更高的重组效率,更有利于大肠杆菌基因组的无痕修饰操作,这为大肠杆菌重组工程提供了更多的选择。
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| 关 键 词： | Red重组系统，选择反选择系统，无痕修饰，大肠杆菌 |
| 收稿时间： | 2019/2/27 0:00:00 |
Combination of novel counter-selection system kil and pSim6 plasmid in recombination engineering |
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| Yujuan Li,Ruyi Chen,Mianfeng Yang and Wei Chen.Combination of novel counter-selection system kil and pSim6 plasmid in recombination engineering[J].Chinese Journal of Biotechnology,2019,35(9):1761-1770. |
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| Authors: | Yujuan Li Ruyi Chen Mianfeng Yang and Wei Chen |
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| Institution: | Guangdong Province Key Laboratory for Biotechnology Drug Candidates, School of Biosciences and Biopharmaceutics, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, Guangdong, China,Guangdong Province Key Laboratory for Biotechnology Drug Candidates, School of Biosciences and Biopharmaceutics, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, Guangdong, China,Guangdong Province Key Laboratory for Biotechnology Drug Candidates, School of Biosciences and Biopharmaceutics, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, Guangdong, China and Guangdong Province Key Laboratory for Biotechnology Drug Candidates, School of Biosciences and Biopharmaceutics, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, Guangdong, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Red recombination system selection/counter-selection system seamless modification Escherichia coli |
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