| 人IL-35单克隆抗体制备及其在定量ELISA检测方法中的应用 |
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| 引用本文： | 何峰容,孙颖,乐鑫,刘勇,刘梦元. 人IL-35单克隆抗体制备及其在定量ELISA检测方法中的应用[J]. 生物工程学报, 2019, 35(9): 1723-1735 |
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| 作者姓名： | 何峰容 孙颖 乐鑫 刘勇 刘梦元 |
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| 作者单位： | 1 湖北大学 生命科学学院 生物催化与酶工程国家重点实验室，湖北 武汉 430062;2 武汉云克隆科技股份有限公司，湖北 武汉 430056,2 武汉云克隆科技股份有限公司，湖北 武汉 430056,2 武汉云克隆科技股份有限公司，湖北 武汉 430056,2 武汉云克隆科技股份有限公司，湖北 武汉 430056,1 湖北大学 生命科学学院 生物催化与酶工程国家重点实验室，湖北 武汉 430062;2 武汉云克隆科技股份有限公司，湖北 武汉 430056;3 药物高通量筛选国家与地方联合工程研究中心，湖北 武汉 430062 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 30973669/H3004)，湖北省教育厅重点研究计划项目 (No. D20141002) 资助。 |
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| 摘 要： | 为了建立人白细胞介素-35 (IL-35)的定量ELISA检测方法,RT-PCR克隆了人IL-35的IL-27EBI3亚基和IL-12p35亚基的编码基因,在大肠杆菌中实现了2个亚基的高效表达。以大肠杆菌表达的IL-27EBI3和IL-12p35重组蛋白作为免疫原,免疫BaLb/c小鼠,选取阳性血清小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,用间接ELISA和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选和克隆,获得了稳定分泌抗IL-27EBI3和抗IL-12p35单克隆抗体的杂交瘤细胞株。在效价测定和特异性鉴定的基础上,进一步筛选出一株能稳定分泌抗IL-27EBI3单克隆抗体的杂交瘤细胞株3B11和一株能稳定分泌抗IL-12p35单克隆抗体杂交瘤细胞株3A10,亚类鉴定两株单抗均为IgG1。应用单抗3B11和3A10建立了IL-35双抗夹心定量ELISA检测方法,借助生物素-亲和素放大效应,该方法检测IL-35线性范围为3.12–200pg/mL,最低检测限为1.26pg/mL,与多种其他抗原的交叉反应率为0.1%,批内相对标准偏差(RSD)为5.1%–5.6%,批间RSD为5.6%–7.2%,添加回收率为89%–103%,达到定量分析的要求,为进一步组装IL-35定量ELISA检测试剂盒打下了基础。
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| 关 键 词： | 人白细胞介素IL-35，单克隆抗体，定量ELISA，试剂盒 |
| 收稿时间： | 2019-04-08 |
Preparation of monoclonal antibodies against human interleukin-35 and their application in a quantitative ELISA for interleukin-35 detection |
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| Fengrong He,Ying Sun,Xin Yue,Yong Liu and Mengyuan Liu. Preparation of monoclonal antibodies against human interleukin-35 and their application in a quantitative ELISA for interleukin-35 detection[J]. Chinese journal of biotechnology, 2019, 35(9): 1723-1735 |
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| Authors: | Fengrong He Ying Sun Xin Yue Yong Liu Mengyuan Liu |
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| Affiliation: | 1 State Key Laboratory of Biocatalysis and Enzyme Engineering, College of Life Sciences, Hubei University, Wuhan 430062, Hubei, China;2 Wuhan Coud-clone Science and Technology Co. Ltd, Wuhan 430056, Hubei, China,2 Wuhan Coud-clone Science and Technology Co. Ltd, Wuhan 430056, Hubei, China,2 Wuhan Coud-clone Science and Technology Co. Ltd, Wuhan 430056, Hubei, China,2 Wuhan Coud-clone Science and Technology Co. Ltd, Wuhan 430056, Hubei, China and 1 State Key Laboratory of Biocatalysis and Enzyme Engineering, College of Life Sciences, Hubei University, Wuhan 430062, Hubei, China;2 Wuhan Coud-clone Science and Technology Co. Ltd, Wuhan 430056, Hubei, China;3 National and Local Joint Engineering Research Center of High-throughput Drug Screening Technology, Wuhan 430062, Hubei, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | human interlukin-35 monoclonal antibody quantitative ELISA kit |
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