| 融合表达新冠病毒S1与N蛋白的非复制型重组腺病毒的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 毛彤瑶,张鹏,姜苏芮,李丹地,段招军.融合表达新冠病毒S1与N蛋白的非复制型重组腺病毒的构建与鉴定[J].病毒学报,2024(2):225-232. |
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| 作者姓名： | 毛彤瑶 张鹏 姜苏芮 李丹地 段招军 |
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| 作者单位： | 1. 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室,国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;2. 甘肃中医药大学公共卫生学院 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划（项目号：2022YFC2304302）,题目：呼吸道疾病非注射剂型疫苗研发及靶向递送技术体系研究~~； |
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| 摘 要： | 体外构建融合表达新型冠状病毒(SARS-CoV-2)S1抗原与N抗原的复制缺陷型重组腺病毒疫苗，为深入开展该疫苗免疫原性的研究提供基础。利用Overlap PCR和同源重组方法构建插入SARS-CoV-2的S1-N基因的重组腺病毒质粒pKAd5-S1-N，通过琼脂糖凝胶电泳、多酶切、测序等方法鉴定重组质粒正确性；重组质粒转染HEK293A细胞获得病毒毒种AdV5-S1-N并扩增，氯化铯密度梯度离心法纯化病毒，有限稀释分析法测病毒滴度，Western blot方法验证AdV5-S1-N重组腺病毒S1-N融合蛋白表达情况；将AdV5-S1-N疫苗通过肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠，第14d采集颌下静脉血，ELISA法检测血清针对S1和N蛋白抗原的特异性抗体滴度。成功获得滴度为9.45×1011IU/mL的重组腺病毒AdV5-S1-N。Western blot结果发现：AdV5-S1-N感染细胞后，融合蛋白可正常表达，与抗S1蛋白及抗N蛋白抗体均有特异结合。ELISA结果显示免疫重组腺病毒的小鼠可产生针对S1和N蛋白的特异性IgG抗体。应用复制缺陷型腺病毒载体成功获得...
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| 关 键 词： | 新型冠状病毒 腺病毒载体疫苗 体液免疫 融合表达 |
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