免疫亲和-HPLC法测定婴幼儿配方乳粉中维生素B12

目的：建立免疫亲和-高效液相色谱法测定婴幼儿乳粉中维生素B12的方法。方法：样品经缓冲溶液提取、过滤，滤液过维生素B12免疫亲和柱净化后，洗脱液在60℃下氮吹定容上机。采用C18色谱柱，柱温为30℃，流动相为乙腈和水（15∶85），梯度洗脱，流速为0.25mL/min，紫外检测器波长为361nm，外标法定量。结果：维生素B12在0.01～1μg/mL范围内呈良好线性关系，相关系数（r）为0.999 9。本方法的检出限为5μg/kg。在样品中添加不同添加量水平的标准物质，加标回收率为80%～89%；选择不同含量的样品，重复测定相对标准偏差（RSD）为0.3%～1.6%。结论：该方法较现行国标GB 5413.14—2010的微生物法操作简便，易于掌握，可提高工作效率。