Dppa2 基因启动子区Oct4 结合位点突变对其活性的影响 |
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引用本文: | 马娜 陈天姬 李珑 陈婧 杜娟. Dppa2 基因启动子区Oct4 结合位点突变对其活性的影响[J]. 现代生物医学进展, 2015, 15(21): 4001-4004 |
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作者姓名: | 马娜 陈天姬 李珑 陈婧 杜娟 |
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作者单位: | 中南大学生殖与干细胞工程研究所 |
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基金项目: | 湖南省科技厅科技计划项目(2009FJ3058);中南大学中央高校基本科研业务费专项资金项目(2013zzts273);中南大学教师研究基金(905010042) |
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摘 要: | 目的:探讨Dppa2 基因5'' 端启动子区Oct4 结合位点突变对Dppa2基因启动子活性的影响。方法:PCR 扩增包括Oct4 结合位点的Dppa2 基因5'' 端转录起始点上游-2439~+293 bp 的启动子序列,片段长度为2732 bp。将该片段连接到pGL3-Basic 载体,构建野生型pGL3-2439表达载体。采用定点突变法,将-1959~-1957 位碱基的GCA突变成TAG,构建Oct4 结合位点突变型pGL3-mo2439 表达载体。用上述两种表达载体、PGL3-basic 载体和Oct4 表达载体分别瞬时转染HEK 293 细胞。细胞培养48 h后,利用双荧光素酶报告系统测定各组细胞表达的荧光素酶的相对活性。结果:经琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定,证实野生型(pGL3-2439)和突变型(pGL3-mo2439)载体构建成功。荧光素酶活性测定结果显示,转染Dapp2 基因启动子野生型pGL3-2439 表达载体的细胞组荧光素酶的相对活性为16.307,突变型pGL3-mo2439 表达载体的细胞组荧光素酶的相对活性为10.634。Oct4 结合位点突变后,Dppa2 基因启动子区转录活性较野生型降低了35 %。结论:Dppa2基因5''端启动子区-1959~-1957 位的Oct4 结合位点突变可能导致Dppa2 基因启动子活性下降
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关 键 词: | Dppa2 启动子;Oct4 结合位点;荧光素酶 |
The Mutation of Oct4 Binding Site in Promoter Region of Dppa2 Gene andits Impacts on the Dppa2 Gene Expression |
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Abstract: | |
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Keywords: | Dppa2 promoter Oct4 binding site Luciferase |
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