| 北柴胡细胞色素P450酶基因的克隆及其植物过量表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 徐洁森,魏建和,赵立子,隋春,徐艳红. 北柴胡细胞色素P450酶基因的克隆及其植物过量表达载体的构建[J]. 生物技术通讯, 2012, 23(4): 537-541 |
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| 作者姓名： | 徐洁森 魏建和 赵立子 隋春 徐艳红 |
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| 作者单位： | 北京协和医学院药用植物研究所,北京 100193;中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室,北京 100193 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81072994);北京市自然科学基金(5102033);中医药行业科研专项(201107011) |
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| 摘 要： | 目的:克隆北柴胡中可能参与柴胡皂苷生物合成的细胞色素P450酶基因,构建其过量表达载体,为通过转基因验证其功能奠定基础。方法:在454高通量测序获得5'和3'端部分cDNA序列的基础上,利用LD-PCR方法获得全长cDNA,根据全长cDNA序列设计含有酶切位点的PCR引物,利用高保真酶,以RNA反转录产物为模板PCR扩增细胞色素P450酶基因的开放读框,扩增产物与pEASY-T1 Simple载体连接,转化大肠杆菌DH5α;重组质粒pT1-P450经菌液PCR和酶切方法验证后测序,采用NCBI在线Blastx、DNAman和MEGA4软件对序列进行生物信息学分析,随后将pT1-P450的酶切产物插入双元载体pCAMBIA-SUPER 1300,菌液PCR和酶切验证重组质粒p1300-P450。结果:扩增到了北柴胡细胞色素P450酶基因BcCYP87E,构建了这一基因的过量表达载体。结论:细胞色素P450酶基因的克隆和转基因载体的构建,为后续开展转基因研究,验证其生物功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | 北柴胡 细胞色素P450酶 基因克隆 植物表达载体 |
Cloning and Plant Over Expression Vectors Construction of a Cyto chrome P450 Enzyme Gene from Bupleurum chinense DC. |
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| XU Jie-Sen , WEI Jian-He , ZHAO Li-Zi , SUI Chun , XU Yan-Hong. Cloning and Plant Over Expression Vectors Construction of a Cyto chrome P450 Enzyme Gene from Bupleurum chinense DC.[J]. Letters in Biotechnology, 2012, 23(4): 537-541 |
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| Authors: | XU Jie-Sen WEI Jian-He ZHAO Li-Zi SUI Chun XU Yan-Hong |
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| Affiliation: | 1,2 1.Institute of Medicinal Plant Development,Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical Col lege,Beijing 100193;2.Key Laboratory of Bioactive Substances and Resources Utilization of Chinese Herbal Medi cine,Ministry of Education,Beijing 100193;China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bupleurum chinense DC. cytochrome P450 enzyme gene cloning plant expression vector |
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