豆科凝集素基因Le4的克隆及其表达产物对蚜虫的抗性

植物凝集素是含有一个或者多个非催化结构,并能可逆结合特异单糖或寡糖的蛋白,它具有凝集细胞、沉淀多糖和糖蛋白的功能。近年来,植物凝集素因其独特的生理功能,在农作物抗虫工程中获得了广泛的关注。本研究采用RT-PCR的方法,从浙江苞萝黄大豆叶片中成功克隆了一个新的豆科凝集素Le4基因,利用p ET-28a质粒构建了Le4基因的原核表达载体,成功表达了Le4蛋白。通过对诱导温度及异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)终浓度等条件进行优化,利用Western blotting技术,在Le4表达菌株超声破碎后的上清液中检测到了可溶性的Le4蛋白。通过涂抹法将含有可溶性Le4表达蛋白的大肠杆菌菌液涂抹在小麦叶片上,与涂抹空载体菌液相比,小麦叶片麦长管蚜数目减少了约50%。以上结果初步表明来源于大豆的凝集素基因Le4蛋白具有杀虫效应。