荧光定位法快速准确筛选一种GFP重组质粒细胞株

筛选脂质体介导的稳定转染细胞株的方法需要较多重复工作才能完成,尤其是转染效率不高的细胞。本研究报道一种快速准确获取稳定转染细胞株的方法,供同类实验参考。我们构建的真核表达载体带有可用于筛选阳性克隆的绿色荧光基因和Neo基因,采用脂质体将其转染入C2C12细胞,并用G418筛选阳性克隆,荧光显微镜下挑选绿色荧光与目的基因表达的蛋白在细胞内定位一致的细胞株,Western Blot可检测到融合蛋白表达,免疫共聚焦显示目的蛋白表达量增加;荧光散在分布于整个细胞的细胞株,经Western Blot检测没有融合蛋白表达。因此,根据GFP绿色荧光分布的位置可以准确挑选带有目的基因重组质粒的稳定细胞株。