人TNF-α点突变蛋白的制备及免疫原性分析

肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)在人体内的毒副作用可以通过定点突变的方式得以改善。本研究结合公开文献及空间结构展示软件(discovery studio 3.5)对人TNF-α进行了的点突变实验。运用重叠PCR方法成功引入S95F、Y115F、Y119W和S147Y四个单点突变。经原核表达及镍柱亲和层析纯化后得到人TNF-α及其点突变蛋白。通过测定人TNF-α及其点突变蛋白的生物活性发现三种点突变(S95F,Y115F,Y119W)都显著降低人TNF-α对L929细胞的杀伤率。小鼠免疫实验证明4个突变蛋白均可刺激机体产生针对人TNF-α的抗体效应。