地中海诺卡氏菌丙氨酸脱氢酶的纯化和性质

采用硫酸铵分部沉淀、DEAE纤维素-52柱层析和亲和蓝柱层析的方法，分离纯化了地中海诺卡氏菌(Nocardia mediterranei)U-32丙氨酸脱氢酶(ADH)，用聚丙烯酰胺凝肢电泳鉴定为单一组份。以聚丙烯酰胺凝胶梯度电泳测得丙氨酸脱氢酶的分子量为228000，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其亚基分子量为38000，表明地中海诺卡氏菌U-32丙氢脱氢酶由六个相同的亚基组成。ADH加氨反应最适pH为8．5，脱氨反应最适pH为11．5，ADH的pH稳定范围在pH 7．5-11．5。脱氨反应的最适温度为50℃。ADH的米氏常数KM为：丙酮酸4．88×10-4mol／L；NH+44．03×10-3Mol／L；NADH 6．02×10-5Mol／L；L—Ala7．45×10-3mol／L；NAD+6．67×10-5mol／L。 Hill作图法求得ADH的Hill系数n为：ADH对丙酮酸、NADH和NAD+的Hill系数都为1；对L—Ala和NH4+的Hill系数n值分别为0．52和0．51，ADH对L—Ala和NH+4有负协同效应，由此初步推测ADH是一个调节酶。