二硫键形成促进双载体转断裂B区缺失型凝血因子Ⅷ基因 |
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作者姓名: | 朱甫祥 杨树德 刘泽隆 缪静 屈慧鸽 迟晓艳 |
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作者单位: | 鲁东大学生命科学学院;鲁东大学生命科学学院;鲁东大学生命科学学院;鲁东大学生命科学学院;鲁东大学生命科学学院;鲁东大学生命科学学院 |
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基金项目: | 山东省自然科学基金(ZR2010CM061), 烟台市科技计划项目(2008152), 教育部留学回国人员科研启动基金项目(20071108)和鲁东大学科研基金项目(LZ20083305)资助项目 |
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摘 要: | 双载体共转B区缺失型凝血因子Ⅷ(BDD-FⅧ)重链和轻链基因是克服腺相关病毒载体(AAV)容量限制的一种策略, 但重链分泌的低效性产生链不均衡性,影响转基因的功效.假设重、轻链链间二硫键形成可提高双载体转BDD-FⅧ基因的功效,本文将BDD-FⅧ的重链A2区的Met662和轻链A3区的Asp1828突变为Cys.双载体培养的COS-7细胞共转染突变重链和轻链基因,Western blot显示细胞内二硫键交联的重、轻链蛋白形成,ELISA和Coatest分析细胞培养上清的BDD-FⅧ重链分泌量和生物活性,分别为(109 ± 13) μg/L和(0.65 ± 0.12) U/ml,明显高于共转野生型重链和轻链基因细胞((71 ± 11) μg/L和(0.35 ± 0.05) U/ml).结果表明,链间二硫键形成可提高双载体转BDD-FⅧ基因的功效,为进一步动物体内运用双AAV载体转BDD-FⅧ基因提供了实验依据.
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关 键 词: | B区缺失的凝血VIII因子;双载体;转基因;链间二硫键 |
收稿时间: | 2011-06-30 |
修稿时间: | 2011-10-25 |
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