循环内皮微粒相关microRNA在巨噬细胞炎性反应诱发动脉粥样硬化发生中的作用机制

目的研究循环内皮微粒相关microRNA在巨噬细胞炎性反应诱发动脉粥样硬化（AS）发生的作用机制。 方法选取实验组和对照组SPF级5周小鼠各50只。实验小鼠分4组：对照组、动脉粥样硬化模型组（AS模型组）、NC-miRNA组和miRNA-19b抑制剂组，采用油红染色对AS病变的组织学进行观察，计算斑块面积相对比例，并检测生化指标的表达水平，主要包括血清中高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和甘油三酯（TG），ELISA检测血管炎症因子TNF-α、IL-1、IL-6和IL-10的变化，Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、cleaved-caspase-3和Bax表达的变化，实时荧光定量PCR检测miR-19b表达，流式细胞法检测巨噬细胞的凋亡率。多组间比较采用单因素方差分析或者重复测量的方差分析，两两比较采用LSD-t检验。 结果各组胸腔动脉斑块面积百分比：对照组为（0.00±0.00）%；AS模型组为（9.59±6.53）%；NC-miRNA组为（8.96±3.47）%；miRNA-19b抑制剂组为（3.21±2.03）%，三组间比较差异有统计学意义（F = 20.572，P = 0.002）。与对照组比较，AS模型组和NC-miRNA组TC[AS模型组（3.26±0.21）mmol/L；NC-miRNA组（3.13± 0.14）mmol/ L；F = 13.994，P = 0.002]、TG[AS模型组（0.25±0.06）mmol/L；NC- miRNA（0.21±0.02）mmol/L；F = 11.230，P = 0.011）]和LDL-C [AS模型组（1.65±0.11）mmol/ L；NC-miRNA （1.59± 0.27）mmol/L；F = 10.069，P = 0.006）]水平升高，而HDL-CAS模型组[（0.08±0.09）mmol/L；NC-miRNA （0.08±0.05）mmol/L；F = 12.450，P = 0.004）]水平含量降低。与模型组比较，miRNA-19b抑制剂组TC（1.85±0.06）mmol/L、TG（0.15±0.03）mmol/ L和LDL-C（1.21±0.10）mmol/L水平降低，HDL-C （0.11±0.05）mmol/L水平则升高（P均< 0.05）。AS模型组与对照组相比，IL-1（34.06±3.58）g/L、IL-6（92.57±31.97）g/L和TNF-α（63.01±15.65）g/L水平升高，而IL-10（16.86±1.29）g/L的水平降低，NC-miRNA组各指标亦有相同的变化趋势；miRNA-19b抑制剂组IL-1（24.85±6.21）g/L、IL-6（53.29±17.15）g/ L和TNF-α（34.51±6.47 ）g/L水平低于AS模型组和NC-miRNA组（F = 13.671，P = 0.002），IL-10（24.94±4.72）g/L的水平则高于两组（F = 13.675，P = 0.008）。和对照组相比，AS模型组和NC- miRNA组的Bax（AS模型组3.39±0.01；NC-miRNA组0.64±0.02；F = 26.910，P = 0.000）和cleaved-PARP （AS模型组2.47±0.05；NC- miRNA组3.27±0.01；F = 13.226，P = 0.000）表达量升高。但Bcl-2（AS模型组0.67±0.02；NC-miRNA组0.64±0.02；F = 12.585，P = 0.000）表达水平下调。与NC- miRNA组相比，miRNA-19b抑制剂组的促细胞凋亡的蛋白Bax（2.16±0.02）和cleaved-PARP（1.91±0.04）表达水平下调，Bcl-2（1.05±0.01）的表达水平上调。与对照组比较，AS模型组（2.71±0.02）和NC-miRNA组（2.43±0.02）的miRNA- 19b的转录水平增加，差异有统计学意义（P均< 0.05），miRNA-19b抑制剂组（1.52±0.01）转录水平有升高，但相较于AS模型组和NC-miRNA组的变化其增加量不显著，（F = 15.353，P = 0.002）。miRNA-19b基因转录水平：对照组为1.02±0.03；AS模型组为2.71±0.02；NC- miRNA组为2.43±0.02；miRNA- 19b抑制剂组为1.52±0.01（P均 < 0.05）。细胞凋亡率：对照组为（4.41±0.18）%；AS模型组为（7.16±0.73）%；NC-miRNA组为（6.29±0.24）%；miRNA-19b抑制剂组为（5.01±0.11）%，（F = 12.889，P = 0.008）。 结论miRNA-19b抑制剂可以减少巨噬细胞的凋亡，降低促炎症因子，可减少由于AS引起的血管厚度的增加，减少AS斑块的面积比例，使血脂中的TC、TG和LDL-C水平降低，HDL-C水平则有升高，这对冠心病的临床诊疗具有重要的临床指导意义。

Mechanism of circulating endothelial microparticles related microRNA in the atherosclerosis induced by inflammatory response of macrophage