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| 水牛MyD88cDNA的克隆与原核表达 | |
| 引用本文： | 张晓茹,匡文华,成鹰,杜丽,张冬琳,郝永昌,雷明,焦寒伟,刘涛,祁超,王凤阳.水牛MyD88cDNA的克隆与原核表达[J].基因组学与应用生物学,2011,30(2). |
| 作者姓名： | 张晓茹 匡文华 成鹰 杜丽 张冬琳 郝永昌 雷明 焦寒伟 刘涛 祁超 王凤阳 |
| 作者单位： | 1. 华中师范大学生命科学学院,武汉,430079;海南大学农学院,海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室(筹)海口市动物基因工程重点实验室,海口,570228 2. 海南大学农学院,海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室(筹),海口市动物基因工程重点实验室,海口,570228 3. 华中师范大学生命科学学院,武汉,430079 |
| 基金项目： | 国家转基因生物新品种培育重大专项 |
| 摘 要： | 采用RT-PCR方法从水牛外周血白细胞总RNA中扩增出髓样分化因子88 (mydoid differentiation factor 88,MyD88) cDNA序列,PCR产物分离纯化后,与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序,并进行生物信息学分析;构建pET28a-MyD88表达载体,并将其转化至E.coli BL21 (DE3),经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、镍柱亲和层析纯化和Western blotting分析.结果显示,克隆到的水牛MyD88 cDNA全长为1 189 bp,含有1个891 bp的开放阅读框,编码296个氨基酸,理论等电点为5.65.经IPTG诱导表达后,得到一个带His·Tag的约39 kD的重组融合蛋白.用抗His单克隆抗体进行Western blotting,得到1条约39 kD特异性抗体结合带,表明水牛MyD88原核表达载体成功构建并表达.本研究为进一步开展水牛MyD88的结构功能分析奠定了基础. |
| 关 键 词： | 水牛 基因克隆 原核表达 |
Gene Cloning and Prokaryotic Expression of MyD88 cDNA from Buffalo |
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| Zhang Xiaoru,Kuang Wenhua,Cheng Ying,Du Li,Zhang Donglin,Hao Yongchang,Lei Ming,Jiao Hanwei,Liu Tao,Qi Chao,Wang Fengyang.Gene Cloning and Prokaryotic Expression of MyD88 cDNA from Buffalo[J].Genomics and Applied Biology,2011,30(2). | |
| Authors: | Zhang Xiaoru Kuang Wenhua Cheng Ying Du Li Zhang Donglin Hao Yongchang Lei Ming Jiao Hanwei Liu Tao Qi Chao Wang Fengyang |
| Abstract: | |
| Keywords: | MyD88 |
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