昆明鼠肠激酶轻链的原核表达、复性与纯化

目的:构建昆明小鼠十二指肠肠激酶轻链(mEKL)大肠杆菌高效表达系统,并建立复性与纯化方法。方法:RT-PCR法扩增mEKL全长cDNA,以融合表达载体pET32a克隆于大肠杆菌BL21(DE3)和Origami(DE3),采用阴离子交换层析纯化复性表达产物,经牛肠激酶消化回收mEKL。结果:扩增得到723bp的mEKL全长cDNA,经序列分析发现,昆明鼠来源的mEKLcDNA序列的Ser131密码子中存在1个同义点突变。mEKL在2种宿主菌中的表达产物均为包涵体蛋白,经稀释复性、阴离子交换层析纯化和肠激酶切割可得高纯度mEKL。结论:成功构建昆明鼠源mEKL高效表达工程菌,并建立相应的纯化方法。