表达产物可用IMAC快速纯化的原核表达载体的组建与应用

以原核高效表达载体pBV，220为骨架载体，采用互补寡核苷酸插入法在pBV220多克隆位点的上游插入了起始密码子和6组氨酸编码序列，将此新质粒命名为pBV222，以此载体表达的目的蛋白在N-段带有His6尾以利于IMAC层折快速纯化目的蛋白，酶切及核苷酸序列分析验证了我们的设计。将IL-2和GM—CSF cDNA克隆入pBV222载体中，表达的目的蛋白与预期的分子量相同，表达产物以包涵体的形式存在，表达量比非融合蛋白有明显的提高。且这种融合蛋白保留GM-CSF的生物学活性。表达菌体直接用6mol／L盐酸胍裂解或首先分离包涵体之后盐酸胍裂解，上清直接IMAC层析，以阶段性或线性pH梯度洗脱特异的目的蛋白。SDS-PAGE分析蛋白纯度在90％以上。